產(chǎn)品屬性:
名稱 小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞
2.組織來源:關(guān)節(jié)軟骨組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:
小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分離自關(guān)節(jié)軟骨組織;關(guān)節(jié)軟骨屬于透明軟骨,表面光滑、呈淡藍(lán)色、有光澤,它是由一種特殊的叫做致密結(jié)締組織的膠原纖維構(gòu)成的基本框架,這種框架呈半環(huán)形,類似拱形球門,其底端緊緊附著在下面的骨質(zhì)上,上端朝向關(guān)節(jié)面,這種結(jié)構(gòu)使關(guān)節(jié)軟骨緊緊與骨結(jié)合起來而不會(huì)掉下來,同時(shí)當(dāng)受到壓力時(shí)候,還可以有少許的變形,起到緩沖壓力的作用。在這些纖維之間,散在分布著軟骨細(xì)胞,軟骨細(xì)胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細(xì)胞組成,這些軟骨細(xì)胞維持關(guān)節(jié)軟骨的正常代謝。關(guān)節(jié)軟骨沒有神經(jīng)支配,也沒有血管,其營(yíng)養(yǎng)成分必須從關(guān)節(jié)液中取得,而其代謝廢物也必須排至關(guān)節(jié)液中,關(guān)節(jié)軟骨的這種營(yíng)養(yǎng)代謝必須通過關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng),使關(guān)節(jié)軟骨不斷的受到壓力刺激才行,所以關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)對(duì)于維持關(guān)節(jié)軟骨的正常結(jié)構(gòu)起重要的作用。關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞位于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)。幼稚的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞位于關(guān)節(jié)軟骨組織的表層,單個(gè)分布、體積較小、呈橢圓形,長(zhǎng)軸與關(guān)節(jié)軟骨表面平行,越向深層的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形,細(xì)胞核圓形或卵圓形、染色淺,細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性,常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi),這些關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成,稱為同源細(xì)胞群。電鏡下,關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞有突起和皺褶,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中,關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形,在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
5.方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞采用膠原酶聯(lián)合消化制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳2-3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
磷酸化CRK抗體
磷酸化周期素依賴性激酶6抗體
磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體
磷酸化周期素依賴性激酶2抗體
磷酸化α-連環(huán)蛋白抗體
大鼠神經(jīng)肽Y(NPY)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠腎上腺素(EPI)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠腎素(Renin)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠腎損傷分子-1(Kim-1)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞人艾杜糖硫酸酯酶(IDS)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人艾杜糖硫酸酯酶(IDS)elisa檢測(cè)試劑盒
人艾柯病毒IgG(ECHO IgG)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人艾柯病毒IgG(ECHO IgG)elisa檢測(cè)試劑盒
人艾柯病毒IgM(ECHO IgM)elisa分析檢測(cè)試劑盒