化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | GOY-01X0926 |
名稱 輸尿管上皮細(xì)胞
2.組織來(lái)源：尿道組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人輸尿管上皮細(xì)胞分離自輸尿管組織；輸尿管上接腎盂，下連膀胱，是一對(duì)細(xì)長(zhǎng)的管道，呈扁圓柱狀，位于腹膜后，為一肌肉粘膜所組成管狀結(jié)構(gòu)，沿腰大肌內(nèi)側(cè)的前方垂直下降進(jìn)入骨盆。輸尿管有三個(gè)狹窄部：一個(gè)在腎盂與輸尿管移行處（輸尿管起始處）；一個(gè)在越過(guò)小骨盆入口處；后一個(gè)在進(jìn)入膀胱壁的內(nèi)部。這些狹窄是結(jié)石、及壞死組織容易停留的部位。輸尿管——膀胱連接處有一種特殊結(jié)構(gòu)，即瓦耳代爾鞘，它能有效地防止膀胱內(nèi)尿液返流到輸尿管。臨床上將輸尿管分為上、中、下三段，也可稱為腹段、盆段、膀胱段。其中，腹段自腎盂輸尿管交界處，到跨越髂動(dòng)脈處；盆段，自髂動(dòng)脈到膀胱壁；膀胱段，自膀胱壁內(nèi)斜行至膀胱粘膜、輸尿管開(kāi)口。輸尿管管壁分為4層，黏膜層、固有層、肌層、外膜。黏膜層表面為移行上皮，約有4-5層細(xì)胞；固有層由細(xì)密的結(jié)締組織構(gòu)成，內(nèi)含膠原纖維和少量彈性纖維；輸尿管肌層主要由內(nèi)縱和外環(huán)兩層平滑肌組成；外膜為疏松結(jié)締組織，營(yíng)養(yǎng)血管由外膜進(jìn)入輸尿管。其中，輸尿管上皮細(xì)胞主要分布于黏膜層。
5.方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人輸尿管上皮細(xì)胞采用先中性蛋白酶消化、然后機(jī)械分離法使輸尿管分層、后膠原酶消化，并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人輸尿管上皮細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
抗凝血酶3抗體
血清白蛋白單克隆抗體
磷酸化絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體
AEG-1抗體
肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型1A抗體
大鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠內(nèi)脂素(visfatin)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白酶抑制劑(vaspin)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素(GC)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)
大鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)elisa檢測(cè)試劑盒
輸尿管上皮細(xì)胞人P0蛋白抗體(IgG)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人P0蛋白抗體(IgG)elisa檢測(cè)試劑盒
人P0蛋白抗體(IgM)elisa分析檢測(cè)試劑盒
人P0蛋白抗體(IgM)elisa檢測(cè)試劑盒
人P16elisa檢測(cè)試劑盒
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
化工儀器網(wǎng)