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詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖：
下列是產(chǎn)品的訂購(gòu)信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號(hào) |
DNA Marker（100bp～2kb) | 50次（300μ)|200次（4×300μl) | GOY-F10125 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
本制品是由單獨(dú)制備的PCR產(chǎn)物混合而成，共有6條DNA片段，已加入上樣緩沖液，可直接電泳，每次上樣6μl，為便于電泳后觀察，750bp條帶亮，每次用量約為100ng，其它條帶的DNA每次用量約為50ng。本制品濃度約為50μgDNA/ml。 條帶圖：6μl加樣，凝膠長(zhǎng)度10cm，電壓6V/cm，0.5×TBE Buffer 貯存液組成：10mM Tris-HCl（pH8.4)，10mM EDTA，0.02％溴酚蘭，5％甘油 儲(chǔ)存條件：-20℃可保存一年以上，4℃保存三個(gè)月。 使用方法： 1．取3-6μl本產(chǎn)品加入瓊脂糖凝膠的加樣孔中（每1mm點(diǎn)樣孔寬度加1μl，如果加樣孔較寬，可適當(dāng)增加上樣量)，進(jìn)行電泳。 2．建議電泳條件為1.0-2.5%瓊脂糖凝膠，正負(fù)極之間電壓4-10V/cm。 3．通過(guò)EB染色，在紫外燈下觀察電泳條帶。 注意事項(xiàng)： 1．本產(chǎn)品可直接使用，不要加熱。 2．及時(shí)更換電泳緩沖液并使用新制的凝膠，以免影響電泳結(jié)果。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
兔子雌二(E2)ELISA試劑盒 6-O-(p-Hydroxybenzoyl)glucose 中文名：6-O-對(duì)羥基苯甲酰葡萄糖 分子式：C13H16O8 度：98.0%
兔子雌二(E2)ELISAKit 6-O-(p-Hydroxybenzoyl)glucose 202337-44-8 中文名：6-O-對(duì)羥基苯甲酰葡萄糖 分子式：C13H16O8
兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒 6-O-(p-Hydroxybenzoyl)glucose 中文名：6-O-對(duì)羥基苯甲酰葡萄糖 分子式：C13H16O8
兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISAKit 6-Hydroxystigmasta-4,22-dien-3-one 中文名： 分子式：C29H46O2 度：%
兔子層連蛋白elisa試劑盒 兔子層連蛋白試劑盒 規(guī)格型號(hào)：96T/48T 兔子層連蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子層連蛋白試劑盒、兔子層連蛋白elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個(gè)月。 5-Hydroxymethylfurfural 67-47-0 中文名：5-羥甲基糠醛 分子式：C6H6O3
1,2,3,4-四氫萘(THN)(Standard for GC, ≥99.5% (GC)) 1,2,3,4-Tetrahydronaphthalene 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC, ≥99.5% (GC) ELISAKitLipase人脂肪酶規(guī)格：48T/96T
三乙酯(TEP)(Standard for GC,>99.7%(GC)) Triethyl phosphate 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,>99.7%(GC) 小鼠0脂酶A2(PL-A2)ELISA試劑盒 ，英文名： PL-A2 ELISA Kit
十三烷(Standard for GC,>99%(GC)) Tridecane 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,>99%(GC) 大鼠雌二受體(ER)ELISA檢測(cè)試劑盒ratEsadiolreceptor,ERELISAKit 96T/48T
十四(Standard for GC, ≥99.5% (GC)) 1-Tetradecanol 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC, ≥99.5% (GC) 人調(diào)寧蛋白-1(CNN1)試劑盒 Human Calponin-1,CNN1 ELISA Kit
十一烷(standard for GC,≥99.5%(GC)) Undecane 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99.5%(GC) RatN-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro,AcSDKPELISAKit大鼠N-乙?；?/span>-絲氨酰-天門(mén)冬酰-賴(lài)氨酰-脯(AcSDKP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
十一酸(Standard for GC,≥99.0%(GC)) Undecanoic acid 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.0%(GC) D-蘋(píng)果酸待測(cè)樣品處理試劑盒20
甲基壬基甲酮(Standard for GC,≥99.5%(GC)) 2-Undecanone 質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC) MouseproteinkinaseB,PKBELISA試劑盒小鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸甲酯(標(biāo)準(zhǔn)品) cis-4,7,10,13,16,19-Docosahexaenoic acid methyl ester 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠0脂酶A2(PL-A2)ELISA 試劑盒
順式-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(標(biāo)準(zhǔn)品) cis-5,8,11,14,17-Eicosapentaenoic acid 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 The rat cellar protein Caveolin1 (Cav-1) ELISA Kit 大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA試劑盒
Celite 硅藻土 545(助濾劑,碳酸鈉處理,通量煅燒) Celite 545 質(zhì)量規(guī)格：助濾劑,碳酸鈉處理,通量煅燒 HumanElastinELISAKit 人彈性蛋白(Elastin)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
DNA Ladder（100～2000bp)組織ZAP70激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）
細(xì)胞ZAP70激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）
組織YES激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）
細(xì)胞YES激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）
組織VEGFR2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
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