詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖:
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
DNA Ladder J (150~1500bp) | 50次|250次 | GOY-F10133 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
儲存條件:冷凍(-20℃) 技術(shù)規(guī)格 Band 150,250,350,450,550,650,750,850,1000,1500 bp; Storage Buffer 10mMTris-HCl(pH 7.6),10mMEDTA,0.033%bromophenol blue,0.008%xylene cyanoland 10%glycerol. |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí),上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
兔子S100B蛋白(S-100B)ELISAKit 6-Aminoindole 5318-27-4 中文名:6-氨基吲哚 分子式:C8H8N2 度:98.0%
兔子E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISAKit 6-Aminoindazole 6967-12-0 中文名:6-氨基吲唑 分子式:C7H7N3 度:98.0%
兔子D二聚體(D2D)ELISA試劑盒 6-Amino-4-hydroxy-2-naphthalenesulfonic acid 90-51-7 中文名:6-氨基-4-羥基-2-萘磺酸 分子式:C10H9NO4S 度:98.0%
兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA試劑盒 6-Amino-4-hydroxy-2-naphthalenesulfonic acid 90-51-7 中文名:6-氨基-4-羥基-2-萘磺酸 分子式:C10H9NO4S
兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISAKit 9,9-Bis(4-amino-3-methylphenyl)fluorene 107934-60-1 中文名:9,9-雙(4-氨基-3-甲)芴 分子式:C27H24N2
1-(三氟乙酰)咪唑(用于GC衍生化,≥98.5%) 1-(Trifluoroacetyl)imidazole 質(zhì)量規(guī)格:用于GC衍生化,≥98.5% 大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA檢測試劑盒ratEndothelin1,ET-1ELISAKit 96T/48T
2,3-二丙酰胺(98%) 2,3-Dibromopropionamide 質(zhì)量規(guī)格:0.98 人電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白β肽(ETFB)試劑盒 Human ETFB ELISA Kit
(800目) Talc 質(zhì)量規(guī)格:800目 RatneuropeptideY,NP-YELISAKit大鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
(藥用級,325目) Talc 質(zhì)量規(guī)格:藥用級,325目 EDTA三血液抗凝液100毫升
硼砂pH標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(硼砂PH(25℃):9.18) pH standard-Borax 質(zhì)量規(guī)格:硼砂PH(25℃):9.18 Mousepyruvatedehydrogenase-E1,PDHE1ELISA試劑盒小鼠同酸脫氫酶E1(PDHE1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
3-苯氧芐(98%) 3-Phenoxybenzyl alcohol 質(zhì)量規(guī)格:0.98 小鼠0酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA 試劑盒
果膠(半乳糖醛酸(干基計(jì))≥74.0 %) Pectin 質(zhì)量規(guī)格:半乳糖醛酸(干基計(jì))≥74.0 % Rat connective tissue growth factor (CTGF) ELISA Kit 大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)ELISA試劑盒
三丁酯(AR,99%) Tributyl phosphate 質(zhì)量規(guī)格:AR,99% Humanα-sarcomericactin,α-SCAELISAKit 人α橫紋肌肌動蛋白(α-SCA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
三丁酯(CP) Tributyl phosphate 質(zhì)量規(guī)格:CP HumanAdenovirusAigen,ADV-AgELISA試劑盒人腺病毒抗原(ADV-Ag)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
三丁酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Tributyl phosphate 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 直接細(xì)胞克隆兩步法逆轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒100
DNA Marker J(150~1500bp)組織LYNA激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細(xì)胞LYNA激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織LCK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細(xì)胞LCK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織JAK3激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))