詳細介紹
產(chǎn)品詳細介紹:
本品是常用的檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。用于細胞內(nèi)鈣離子檢測時,Fluo-3 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-3 AM適當(dāng)溶液和細胞一起在20-37℃孵育15-60分鐘進行熒光探針裝載,隨后適當(dāng)洗滌,洗滌后可以考慮適當(dāng)再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細胞內(nèi)*轉(zhuǎn)變成Fluo-3。本Fluo-3 AM (鈣離子熒光探針) 是配制于無水DMSO中的儲存液,濃度為5mM。 分子式:C51H50Cl2N2O23 分子量:1129.85 Fluo-3和Fura-2相比,其優(yōu)點是:一方面可以被氬離子激光(argon-ion laser)的488nm激發(fā)光激發(fā),便于檢測;另一方面,Fluo-3和鈣離子結(jié)合后熒光變化更強,即對鈣離子濃度變化的檢測更加靈敏;同時,Fluo-3和鈣離子的結(jié)合能力較弱,這樣可以比Fura-2檢測到細胞內(nèi)更高濃度的鈣離子水平;此外,對于細胞內(nèi)的鈣離子的即時變化反應(yīng)得更加準確,減小了因為和鈣離子解離速度慢而導(dǎo)致的熒光變化滯后。 注意事項: 1. 本Fluo-3 AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。 2. 熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。 儲存條件:-20℃,有效期6個月。 |
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
Intracellular calcium fluorescence probe | 20微升 | GOY-F10142 |
DNA提取流程圖:
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
兔血小板活化因子(rabbit PAF) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝 5-Formyl-2-furylboronic acid 27329-70-0 中文名: 分子式:C5H5BO4 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔血小板活化因子(rabbit PAF) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝 5-Formamide-1-(2-formyloxyethl)pyrazole 116856-18-9 中文名: 分子式:C7H9N3O3 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔血小板活化因子 英文名稱: Rabbit Platelet Activating Factor 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: PAF 4-Hydroxysapriparaquinone 中文名: 分子式:C20H26O4 度:%
兔血纖蛋白原elisa試劑盒 兔血纖蛋白原試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 兔血纖蛋白原試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:兔血纖蛋白原試劑盒、兔血纖蛋白原elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carboxylic acid 22252-43-3 中文名: 分子式:C8H10N2O3S
兔血纖蛋白原(Fbg)ELISAKit 4-Aminobutyric acid 中文名:4-氨基丁酸 分子式:C4H9NO2
甲基反亞油酸甲酯(分析標準品) Methyl linolelaidate 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 ELISAKitITGαM/CD11b人整合素αM型規(guī)格:48T/96T
肉豆蔻酸甲酯(分析標準品,≥99.5%(GC)) Methyl myristate 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,≥99.5%(GC) 小鼠亮酸豐富α2-糖蛋白1(LRG1)ELISA試劑盒 ,英文名: LRG1 ELISA Kit
棕櫚酸甲酯(分析標準品,≥99.0%(GC)) Methyl palmitate 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,≥99.0%(GC) 人不對稱二甲基精(ADMA)ELISA檢測試劑盒Humanasymmeicaldimethylarginine,ADMAELISAKit 96T/48T
亞麻酸甲酯(標準品) Methyl linolenate 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 大鼠血小板衍生生長因子B(PDGF-B)試劑盒 Rat platelet-derived growth factor-B,PDGF-B ELISA Kit
十一酸甲酯(標準品) Methyl undecanoate 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 英文名稱RatHistoneDeacetylaseELISAKit大鼠組織蛋白去乙?;?/span>(HD)規(guī)格:96T/48T
十九酸甲酯(標準品) Methyl nonadecanoate 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 鈣離子膜通道鈣交換體(NCX/內(nèi)質(zhì)網(wǎng))功能熒光檢測試劑盒20
丙二酸(標準品) Malonate 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 ELISAKitIegrinαⅤβ3人整合素αⅤβ3規(guī)格:48T/96T
D-異抗壞血酸(標準品) D-(?)-Isoascorbic acid 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 小鼠連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)ELISA試劑盒 ,英文名: CTNNβ1 ELISA Kit
亞油酸(分析標準品,≥99.0%(GC)) Linoleic acid 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,≥99.0%(GC) 人補體片斷5b(C5b)ELISA檢測試劑盒HumanComplemefragme5b,C5bELISAKit 96T/48T
隱色結(jié)晶紫(標準品) Leucocrystal Violet 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 大鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)試劑盒 Rat Platelet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA kit
細胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fluo-3 AM)組織C-KIT激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細胞C-KIT激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織BTK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細胞BTK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織BMK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。