DNA提取流程圖:
下列是產(chǎn)品的訂購(gòu)信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號(hào) |
超級(jí)雜交液(Oligo探針) | Super hybrid solution(Oligo probe) | 10mL | GOY-F10155 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
本產(chǎn)品為即用型Oligo探針專用核酸雜交液。核酸雜交一般是指用一種標(biāo)記的核酸探針與印跡膜上的核酸進(jìn)行雜交,由此檢測(cè)印跡膜上是否存在與探針同源的核酸分子(靶分子)。核酸雜交是分子生物學(xué)的基本技術(shù)之一,應(yīng)用非常廣泛。 產(chǎn)品特點(diǎn): 1. 既可以用于DNA Oligo探針,也可以用于RNA Oligo探針。 2. 即開即用,使用方便。 儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí),上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
兔色素上皮衍生因子elisa試劑盒 兔色素上皮衍生因子試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔色素上皮衍生因子試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔色素上皮衍生因子試劑盒、兔色素上皮衍生因子 elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 5-Benzimidazolecarboxylic acid 15788-16-6 中文名:5-苯并咪唑甲酸 分子式:C8H6N2O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒 5-Benzoylpentanoic acid 中文名:5-苯甲酰基戊酸 分子式:C12H14O3 度:98.0%
兔色素上皮衍生因子(PEDF)ELISAKit 5-Azacytidine 320-67-2 中文名:5-氮胞苷 分子式:C8H12N4O5 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔軟骨糖蛋白39(rabbit YKL-40) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 5-Chloro-2-nitrobenzoic acid 中文名: 分子式:C7H4ClNO4
兔軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(rabbit COMP) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 4-Hydroxythiobenzamide 中文名: 分子式: 度:98.0%
三環(huán)唑標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%) Tricyclazol solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=2% RatomeinELISAKit大鼠網(wǎng)膜素(omein)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
氟樂(lè)靈標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%) Trifluralin solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=3% FITC蛋白標(biāo)記試劑盒3(200微克/)
草達(dá)津(標(biāo)準(zhǔn)品) Trietazine 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 Mousesexhormone-bindingglobulin,SHBGELISA試劑盒小鼠性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
阿克泰(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%) Thiamethoxam 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98% 小鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)ELISA 試劑盒
三唑酮(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%) Triadimefon 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8% Rat macrophage colony stimulating factor (M-CSF) ELISA Kit 大鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA試劑盒
無(wú)水硫酸鈉(分析標(biāo)準(zhǔn)品,pestizides≤1 ppm) sulfate anhydrous 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,pestizides≤1 ppm HumanMethemoglobin,MHBELISAKit 人高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
甲嘧磺隆(標(biāo)準(zhǔn)品) Sulfometuron-methyl 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 Humanadrenomedullin,ADMELISA試劑盒人腎上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
西草凈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%) Simetryne 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,97% 植物NADPH氧化酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20(10樣本)
喹禾靈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%) Quizalofop-ethyl 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,96% MouseactivatedproteinC,APCELISAKit小鼠活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
精喹禾靈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%) Quizalofop-p-ethyl 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98% 小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA試劑盒 ,英文名: sPECAM-1/sCD31 ELISA Kit
超級(jí)雜交液(Oligo探針)細(xì)胞PKCε激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)
組織PKCδ激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)
細(xì)胞PKCδ激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)
組織PKCγ激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)
細(xì)胞PKCγ激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))