化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
DNA提取流程圖：
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
Super hybrid solution(formamide free) | 100mL | GOY-F10156 |
產(chǎn)品詳細介紹：
核酸雜交一般是指用一種標(biāo)記的核酸探針與印跡膜上的核酸進行雜交，由此檢測印跡膜上是否存在與探針同源的核酸分子(靶分子)。核酸雜交是分子生物學(xué)的基本技術(shù)之一，應(yīng)用非常廣泛。由于核酸雜交效率受印跡膜種類、雜交溫度、探針濃度、雜交液離子強度、雜交液pH及雜交液粘度等因素影響 產(chǎn)品特點： 1. 既可用于Southern雜交(靶分子為DNA)，也可用于和Northern雜交(靶分子為RNA)，還可以用于菌落雜交，基因芯片等雜交。 2. 既可以用于同位素探針的雜交，也可以用于非同位素探針的雜交。 3. 既可以使用DNA(包括DNA Oligo)探針，也可以使用RNA探針(包括RNA Oligo) 4.含多種能夠促進雜交的聚合物，使雜交反應(yīng)能在6～12小時完成，而常規(guī)雜交反應(yīng)一般需要12～24小時。 5.含多種封堵劑，能阻印跡膜對探針分子的非特異性吸附，能有效降低背景信號，延長曝光時間以便檢測到低拷貝的RNA(Northern)和單拷貝的基因(Southern)。 6. A型不含甲酰胺，B型含50%的甲酰胺。后者使雜交在較低溫度就可以完成，適合Tm 較高的分子雜交(如RNA-RNA和RNA-DNA雜交)。 7.跟各種常用的印跡膜兼容，包括硝酸纖維素膜和尼龍膜。 儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。本產(chǎn)品屬于高鹽溶液，低溫下產(chǎn)生沉淀，必須在65℃加熱溶解并充分搖勻后才能使用。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
兔乳鐵傳遞蛋白elisa試劑盒 兔乳鐵傳遞蛋白試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 兔乳鐵傳遞蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔乳鐵傳遞蛋白試劑盒、兔乳鐵傳遞蛋白elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。 5-Androsten-3β-ol-17-one ethyleneketal 7745-40-6 中文名： 分子式：C21H32O3 度：98.0%
兔乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISAkit 5-Aminouracil 932-52-5 中文名：5-氨基 分子式：C4H5N3O2 度：98.0%
兔(LZM)ELISAKit 5-Aminosalicylic acid 中文名：5-氨基水楊酸 分子式：C7H7NO3 度：98.0%
兔熱休克蛋白90elisa試劑盒 兔熱休克蛋白90試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 兔熱休克蛋白90試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔熱休克蛋白90試劑盒、兔熱休克蛋白90 elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。 5-Benzimidazolecarboxylic acid 15788-16-6 中文名：5-苯并咪唑甲酸 分子式：C8H6N2O2
兔熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒 5-Benzoylpentanoic acid 中文名：5-苯甲?；焖?/span> 分子式：C12H14O3
二甲戊樂靈(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%) Pendimethaline 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99% 大鼠FMS樣酪激酶3(Flt3)ELISA檢測試劑盒RatFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISAKit 96T/48T
氯菊酯(標(biāo)準(zhǔn)品) Permethrin (isomers) solution 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白酶體9(LMP7/PSMB9)試劑盒 Human LMP7/PSMB9 ELISA Kit
殘殺威標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%) Propoxur solution 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=2% RatOncostatin-M,OSMELISAKit大鼠抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
草甘膦(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%) N-(Phosphonomethyl)glycine 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5% FLAG(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升
草甘膦標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%) N-(Phosphonomethyl)glycine solution 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=2% MousesinglesandedDNAAibody,ssDNAELISA試劑盒小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
草甘膦標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%) N-(Phosphonomethyl)glycine solution 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=2% 小鼠可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)ELISA試劑盒 ，英文名： sTM ELISA Kit
(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%) Phoxim 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99% 大鼠中性粒細胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA檢測試劑盒Ratneuophilactivatingprotein-2,NAP-2ELISAKit 96T/48T
除草醚標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5%) Nitrofen solution 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=5% 人登革熱抗體IgM(DF-Ab IgM)試劑盒 Human dengue fever aibody IgM,DF-Ab IgM ELISA kit
2-萘氧乙酸(標(biāo)準(zhǔn)品) 2-Naphthoxyacetic acid 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品 RatOrexinAELISAKit大鼠阿立新A(OrexinA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
滅菌丹標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%) N-(Trichloromethylthio)phthalimide solution 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=2% FLUORIDE血液抗凝液100毫升
超級雜交液(不含甲酰胺)組織PKCβ2激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
細胞PKCβ2激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織PKCβ1激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
細胞PKCβ1激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織PKCα激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
化工儀器網(wǎng)