詳細(xì)介紹
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
Denhardt Solution | 250mL | GOY-F10161 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
本產(chǎn)品是經(jīng)典的、用于核酸膜雜交時(shí)降低膜對標(biāo)記探針的非特異結(jié)合的試劑,早在Southern雜交出現(xiàn)10年由Denhardt發(fā)明,該產(chǎn)品可用與Southern(含單拷貝基因)、Northern、非同位素雜交(B型規(guī)格),與硝酸纖維素膜、尼龍膜等各種常用的核酸雜交介質(zhì)兼容。A和B分別適用于同位素和非同位素探針。 儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸、-20℃保存、有效期一年。 |
DNA提取流程圖:
圖
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí),上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒 5-Amino-2-naphthalenesulfonic acid 119-79-9 中文名:5-氨基-2-萘磺酸 分子式:C10H9NO3S
兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISAKit 5-Acetyl-3-chloro-10,11-dihydro-5H-dibenz[b,f]azepine 中文名: 分子式:C16H14ClNO 度:98.0%
兔內(nèi)皮抑素(rabbit ES) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 5-Amino-2-methylindole 7570-49-2 中文名:5-氨基-2-甲基吲哚 分子式:C9H10N2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔內(nèi)皮型合成酶elisa試劑盒 兔內(nèi)皮型合成酶試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 兔內(nèi)皮型合成酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔內(nèi)皮型合成酶試劑盒、兔內(nèi)皮型合成酶elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 5-Amino-1-naphthol 83-55-6 中文名:5-氨基-1-萘酚 分子式:C10H9NO 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA試劑盒 5-Amino-2-methylindole 中文名:5-氨基-2-甲基吲哚 分子式:C9H10N2 度:98.0%
二十烷(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物) Eicosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) RatOsteoprotegerinLigand,OPGLELISAKit大鼠骨保護(hù)素配體(OPGL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
二十一烷(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Heneicosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) G418溶液10毫克/毫升
二十二烷(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Docosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) Mousesolubleclusterofdiffereiation30,sCD30ELISA試劑盒小鼠可溶性CD30(sCD30)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
二十三烷(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Tricosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 小鼠可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)ELISA試劑盒 ,英文名: sLOX-1 ELISA Kit
二十四烷(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Tetracosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 大鼠17羥皮質(zhì)類(17-OHCS)ELISA檢測試劑盒Rat17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCSELISAKit 96T/48T
二十五烷(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Pentacosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人蛋白酶體(prosome,macropain)亞基,β型,2(PSMB2)試劑盒 Human PSMB2 ELISA kit
正辛酸甲酯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Methyl n-Octanoate 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) RatOsteoprotegerin,OPGELISAKit大鼠骨保護(hù)素(OPG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
壬酸甲酯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Methyl Nonanoate 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) Gamborg’sB5基礎(chǔ)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑
甲酯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Methyl Laurate 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) MousesolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISA試劑盒小鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
肉豆蔻酸甲酯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Methyl Myristate 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)ELISA試劑盒 ,英文名: sMHC-2 ELISA Kit
Denhardt溶液(同位素探針)細(xì)胞P38β2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織NLK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細(xì)胞NLK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織NEK6激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細(xì)胞NEK6激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)