詳細介紹
產(chǎn)品詳細介紹:
CECF 具有4~5 個負電荷,pH7~8,有助于在胞內(nèi)滯留。其AM 形式的乙酰酯衍生物具有膜透性,可以被動穿過細胞膜。且BCECF,AM 本身不發(fā)出熒光,通過胞內(nèi)酯酶作用后成為BCECF 發(fā)出熒光信號,可以作為細胞活力的判斷依據(jù)之一。 修飾AM 乙酸酯集團上的羧酸,使之不帶電荷,可以滲透進入細胞膜,一旦進入細胞,其親脂保護基團可以被酯酶非特異性的脫去,成為帶電荷形式,相較于原來的AM 形式,帶電荷形式在胞內(nèi)可以更久的滯留。 BCECF 也用于灌注組織,細胞間隙,植物細胞,對細菌和酵母進行pH 測量。BCECF,AM 可以用于檢測細胞生存能力,細胞毒性,凋亡、粘附和多藥耐藥性以及趨化性等多種功能性檢測。 本試劑為儲液濃度,保存于-20℃,如需進行連續(xù)性實驗,請盡快用完。如果儲液在大于400nm 下有很強的吸光度說明溶液中含有較多的水分,就必須被稀釋立刻使用,而不能被儲存。BCECF,AM 通常應該是無色無熒光信號。 濃度:5mM in 無水DMSO 儲存:-20℃,避光,有效期6個月 |
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
BCECF, AM | 50μL | GOY-F10168 |
DNA提取流程圖:
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
兔結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISAKit 5,6-Dihydro-6-methyl-4H-thieno[2,3-b]thiopyran-4-one 中文名: 分子式:C8H8OS2 度:98.0%
兔結(jié)締組織生長因子(rabbit CTGF) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝 5-(2-Aminopropyl)-7-cyanoindolin-1-yl)propyl benzoate 239463-72-0 中文名: 分子式:C22H25N3O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔交聯(lián)物(PY)ELISA試劑盒 5-(1-Piperazinyl)benzofuran-2-carboxamide 183288-46-2 中文名: 分子式:C13H15N3O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔交聯(lián)物(PY)ELISAKit 4-Chloro-6-iodoquinazoline 98556-31-1 中文名: 分子式:C8H4ClIN2
兔交聯(lián)物(PY)ELISAKit 4-Bromomethyl-2-cyanobiphenyl 中文名: 分子式:C14H10BrN 度:98.0%
2,4,6-三(五氟乙基)-1,3,5-三嗪(>95.0%(GC)) 2,4,6-3(pentafluoroethyl)-1,3,5-triazine 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC) 大鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA檢測試劑盒Ratβ-Thromboglobulin,β-TGELISAKit 96T/48T
2,4,6-三(七氟丙基)-1,3,5-三嗪(>98.0%(GC)) 2,4,6-3(heptafluoropropyl)-1,3,5-triazine 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 人蛋白酶3(PR3)試劑盒 Human PR3 ELISA Kit
α-巰基甘油(>98.0%(GC)(T)) α-Thioglycerol 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T) Ratp53/tumorprotein,p53/TP53ELISAKit大鼠P53(P53)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
3,5-二甲氧基-4-羥基肉桂酸(>99.0%(GC)(T)) 3,5-Dimethoxy-4-hydroxycinnamic Acid 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)(T) GMEM培養(yǎng)基1/10升(片劑)
4'-羥基偶氮苯-2-羧酸(>98.0%(HPLC)(T)) 4'-Hydroxyazobenzene-2-carboxylic Acid 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T) Mousesolubleplateletendothelialcelladhesionmolecule1,sPECAM-1ELISA試劑盒小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
4'-羥基苯偶氮基-4-羧酸水合物(>98.0%(HPLC)(T)) 4'-Hydroxyazobenzene-4-carboxylic Acid Hydrate 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T) 小鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)ELISA試劑盒 ,英文名: sTLR2 ELISA Kit
羧基甲氧基胺半鹽酸鹽(>98.0%(T)) Carboxymethoxylamine Hemi 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T) 大鼠A(VA)ELISA檢測試劑盒RatVitaminA,VAELISAKit 96T/48T
吉拉德試劑 P(>95.0%(T)) Girard's Reagent P 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(T) 人蛋酸酶2(2A),催化亞基,β亞型(PPP2CB)試劑盒 Human PPP2CB ELISA kit
4--1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(含氮量:23.50-24.30 %) 4-Phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione 質(zhì)量規(guī)格:含氮量:23.50-24.30 % RatParathyroidHormoneRelatedProtein,PTHrPELISAKit大鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
N-叔丁基-α-硝酮(>98.0%(HPLC)(T)) N-tert-Butyl-α-phenylnitrone 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T) GMS10電擊感受態(tài)細菌轉(zhuǎn)化試劑盒10
細胞pH指示熒光探針組織GSK3激酶總活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細胞GSK3激酶總活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織GSK3β激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細胞GSK3β激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織GSK3α激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。