詳細介紹
DNA提取流程圖:
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
Fluo-3, AM | 200μL | GOY-F10178 |
產(chǎn)品詳細介紹:
Fluo-2 早是由Roger Tsien 博士發(fā)明的鈣離子指示劑Fluo 系列之一,目前,Fluo-3 和Fluo-4 已成熟商品化。然而,Fluo-2 在細胞內(nèi)比Fluo-4 要更明亮,主要可能是由于大部分細胞對FLuo-2 的加載能力要高于FLuo-4。 Fluo-3 成像涉及到鈣離子信號通路的多個方面,Fluo-3 經(jīng)常應(yīng)用在流式細胞術(shù)上,如螯合劑光活化、第二信使、神經(jīng)遞質(zhì)以及細胞水平的藥理篩選。Fluo-3 在這些應(yīng)用里之所以能大量運用主要是由于其幾個重要特性:Fluo-3 可以被氬離子激光器488nm 激發(fā),并在與Ca2+結(jié)合后,發(fā)射熒光很明亮的熒光信號。Fluo-4 是Fluo-3 以兩個氟原子取代氯原子的類似物,這一微小的結(jié)構(gòu)變化使得Fluo-4探針在488nm 激發(fā)光下的熒光信號得到增強,信號穩(wěn)定持續(xù),可以應(yīng)用于共聚焦顯微鏡、流式細胞儀、微孔板讀數(shù)儀。 Fluo-2、Fluo-3 和Fluo-4 在與Ca2+結(jié)合后熒光增強,與紫外激發(fā)的探針fura-2 和indo-1 不同,不會發(fā)生光譜漂移。熒光光密度在與Ca2+結(jié)合后,增強至少100 倍。 儲存:-20℃,避光,有效期12個月。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
兔鉤端螺旋體IgGelisa試劑盒 兔鉤端螺旋體IgG試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 兔鉤端螺旋體IgG試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:兔鉤端螺旋體IgG試劑盒、兔鉤端螺旋體IgG elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 4-Hydroxy-2-(3-methoxypropyl)-3,4-dihydro-2H-thieno[3,2-e][1,2]thiazine-6-sulfonamide 1,1-dioxide 中文名: 分子式:C10H16N2O6S3 度:98.0%
兔鉤端螺旋體IgG(LepIgG)ELISAKit 6-Benzyloxyindole 15903-94-3 中文名:6-芐氧基吲哚 分子式:C15H13NO
兔鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA試劑盒 4-Hydroxy-2-(3-methoxypropyl)-3,4-dihydro-2H-thieno[3,2-e][1,2]thiazine-6-sulfonamide 1,1-dioxide 154127-42-1 中文名: 分子式:C10H16N2O6S3
兔睪(rabbit TESTO) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝 4-Difluoromethoxy-3-hydroxybenzaldehyde 151103-08-1 中文名: 分子式:C8H6F2O3 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔干細胞因子(rabbit SCF) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝 4-Chlorotestosterone acetate 855-19-6 中文名:醋酸氯 分子式:C21H29ClO3 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
十二烷基硫酸鋰 Lithium Dodecyl Sulfate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,分子生物學(xué)級 MousesubstancePreceptor,SP-RELISA試劑盒小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
硫代甜菜堿 8 Sulfobetaine 8 質(zhì)量規(guī)格:>98%,sigma分裝 小鼠顆粒酶B(GZMB)ELISA試劑盒 ,英文名: GZMB ELISA Kit
硫代甜菜堿 10 Sulfobetaine 10 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 人晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(RAGE/AGER)ELISA檢測試劑盒Humaeceptorforadvancedglycationendproducts,RAGE/AGERELISAKit 96T/48T
硫代甜菜堿 12 Sulfobetaine 12,SDDAB 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 大鼠血清素(5-羥色胺)-N-乙酰基轉(zhuǎn)移酶(AANAT)試劑盒 Rat Serotonin N-acetylansferase,AANAT ELISA kit
恩他卡朋;COMT抑制劑 Entacapone 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 英文名稱RatLBPELISAKit大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)規(guī)格:96T/48T
曲拉通X-114 Triton X-114 質(zhì)量規(guī)格:BC 高多糖多酚植物組織葉綠體DNA萃取試劑盒10/20
曲拉通X-405 Triton X-405 質(zhì)量規(guī)格:70% in H2O ELISAKitFree-T3人游離三甲狀腺原規(guī)格:48T/96T
CHAPS;3-[3-(膽酰胺丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸 CHAPS 質(zhì)量規(guī)格:>98.5% 小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒 ,英文名: Gzms-A ELISA Kit
CHAPSO;3-[(3-膽氨丙基)二甲基氨基]-2-羥基-1-丙磺酸 CHAPSO 質(zhì)量規(guī)格:>99%,分子生物學(xué)級; 大鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA檢測試劑盒RatTissuePolypeptideAigen,TPAELISAKit 96T/48T
二硫赤蘚(DTE);1,4-二硫代赤蘚 1,4-Dithioerythritol 質(zhì)量規(guī)格:>99%,進分sigma 人蛋白激酶C beta II(PKC-bII)試劑盒 Human Protein Kinase C beta II,PKC-bII ELISA Kit
Ca2+ GPCR分析-鈣離子指示探針 Fluo-3, AM組織C-TAK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細胞C-TAK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織B-RAF激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細胞B-RAF激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織AMPK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))