詳細介紹
產(chǎn)品詳細介紹:
鈣黃綠素Calcein-AM是一種對活細胞進行熒光標(biāo)記的細胞染色試劑,發(fā)綠色熒光(Ex=490 nm,Em=515 nm)。 因其在傳統(tǒng)的Calcein(鈣黃綠素)基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基團,增加了疏水性,使其能夠輕易穿透活細胞膜。一旦進入細胞后,Calcein-AM(本身不發(fā)熒光)被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成膜非滲透性的極性分子Calcein,從而被滯留在細胞內(nèi)并發(fā)出強綠色熒光。與其它同類試劑(如BCECF-AM和CFDA)相比,由于Calcein, AM細胞毒性極低,是適合用于活細胞染色的熒光探針,而且不會抑制任何的細胞功能,如增殖和淋巴球的趨化性。 由于死細胞缺乏酯酶,Calcein, AM僅用于對活細胞的細胞生存能力測試和短期標(biāo)記。作為核染色染料的碘化丙啶不能穿過活細胞的細胞膜,它穿過死細胞膜的無序區(qū)域而到達細胞核,并嵌入細胞的DNA雙螺旋從而產(chǎn)生紅色熒光(激發(fā):535 nm,發(fā)射:617 nm),因此PI僅對死細胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發(fā),因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。而用545 nm激發(fā),僅可觀察到死細胞。根據(jù)以上特點,Calcein, AM和PI經(jīng)常被結(jié)合用來作為活細胞和死細胞的雙重染色。由于不同細胞系的佳染色條件不同,我們建議個別確定 Calcein, AM 和 PI的合適濃度。 本品為粉末形式提供的Calcein-AM,純級別(≥95%),可與碘化丙啶(PI)(SY0491)聯(lián)合使用,用于活細胞和死細胞的同時檢測?;蛘咧苯淤徺I我司提供的Calcein-AM/PI活細胞/死細胞雙染試劑盒(SY0501)。 |
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
Calcein, AM, Ultrapure Grade | 50μg|2×50μg|20×50μg|1mg | GOY-F10213 |
DNA提取流程圖:
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
生長激素 英文名稱: growth hormone 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: HGH Przewaquinone A 76843-23-7 中文名:紫丹參甲素 分子式:C19H18O4 度:98.0% 關(guān)鍵詞: 抗腫瘤; 鼠尾草屬; 二萜醌; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
生長分化因子-3 英文名稱: growth differeiation factor 3 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: GDF-3 3-Nitro-1-(4-octylphenyl)-1-propanone 899822-97-0 中文名: 分子式:C17H25NO3 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
生長分化因子 -3(GDF-3) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝 Nitrendipine 39562-70-4 中文名:尼群地平 分子式:C18H20N2O6
生長分化因子 -15(GDF-15) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝 3-Nitro-1-(4-octylphenyl)-1-propanone 中文名: 分子式:C17H25NO3
生化檢測試劑盒 3-Methylamino-1-(2-thienyl)-1-propanol 116539-55-0 中文名: 分子式:C8H13NOS 度:98.0%
L-苯甘甲酯鹽酸鹽 (s)-2-phenylglycine methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:0.98 大鼠水通道蛋白2(AQP-2)ELISA檢測試劑盒RatAquaporin2,AQP-2ELISAKit 96T/48T
D-丙乙酯鹽酸鹽 H-D-Ala-OEt·HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR 人催乳素誘導(dǎo)蛋白(PIP)試劑盒 Human PIP ELISA Kit
利格列汀;利拉利汀 Linagliptin 質(zhì)量規(guī)格:>99%,二肽肽酶-4(DPP-4)抑制劑 RaeceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKLELISAKit大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
L-谷-α-芐酯 L-Glutamic Acid 1-Benzyl Ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR HIS標(biāo)記蛋白化試劑盒5
L-亮乙酯鹽酸鹽 H-Leu-OEt·HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98% MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor2,VEGFR-2/Flk-1ELISA試劑盒小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
L-丙氨酰胺鹽酸鹽 L-Alanamine 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR 小鼠巨噬細胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA試劑盒 ,英文名: MIP-1δ/CCL15 ELISA Kit
L-組鹽酸鹽 L-Histidine monohydrate mono 質(zhì)量規(guī)格:>99%,一水 大鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA檢測試劑盒RatAquaporin0,AQP-0ELISAKit 96T/48T
L-高精鹽酸鹽 L-Homoarginine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 人催乳素抑制激素(PIH)試劑盒 Human PIH ELISA Kit
TPCK(進分) TPCK 質(zhì)量規(guī)格:>97%,進分,Sigma T4376 RaegulatedonactivationinnormalT-cellexpressedandsecreted,RAESELISAKit大鼠正常T細胞表達和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
TPCK TPCK 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR HIS標(biāo)記蛋白擴增試劑盒10
鈣黃綠素,超純級細胞基質(zhì)金屬(MMP-7)活性比色法定量檢測試劑盒
體液基質(zhì)金屬(MMP-7)活性熒光定量檢測試劑盒
組織基質(zhì)金屬(MMP-7)活性熒光定量檢測試劑盒
細胞基質(zhì)金屬(MMP-7)活性熒光定量檢測試劑盒
體液基質(zhì)金屬(MMP-3)活性比色法定量檢測試劑盒
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。