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詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖：
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號(hào) |
50μg|2×50μg|5×50μg | GOY-F10214 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
CM-Dil為DiI的一種衍生物，通過與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細(xì)胞，適合監(jiān)測細(xì)胞運(yùn)動(dòng)以及細(xì)胞定位分析。因具有良好的染料維持性，可用以追蹤多次傳代細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)特性。其有著強(qiáng)而穩(wěn)定的紅色熒光（Ex/Em=553/570nm），與綠色熒光染料以及蛋白具有良好的熒光分辨性，適合做多重指標(biāo)染色。CM-Dil可自由穿透質(zhì)膜進(jìn)入細(xì)胞，從而產(chǎn)生不具有膜滲透性的反應(yīng)產(chǎn)物。經(jīng)過幾次傳代此染料還可完好的維持在活細(xì)胞內(nèi)，染料隨著細(xì)胞分裂傳入子代細(xì)胞內(nèi)，但不會(huì)進(jìn)入相鄰細(xì)胞。至少在72小時(shí)內(nèi)保持熒光信號(hào)（一般可傳3~6代）。工作濃度下，此染料無細(xì)胞毒性，不會(huì)影響細(xì)胞活力以及增殖能力。 與Dil相比，CM-Dil水溶性更好一些，便于懸浮細(xì)胞和固定細(xì)胞染色溶液的制備；CM-Dil攜帶的CM基團(tuán)（即氯甲基替代基團(tuán)）能與多肽及蛋白上的巰基反應(yīng)從而使該分子在醛類物質(zhì)中保持穩(wěn)定。與其他膜染料如DiI和PKH26不同，一些細(xì)胞經(jīng)CM-Dil染色后，可在后續(xù)的固定，透化和石蠟包埋處理中維持穩(wěn)定的標(biāo)記，因此特別適用于同時(shí)做細(xì)胞膜標(biāo)記以及后續(xù)的免疫組化，熒光原位雜交或者電鏡觀察的實(shí)驗(yàn)。 研究證實(shí)，CM-DiI標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。 CAS：180854-97-1 分子式：C68H105Cl2N3O 分子量：1051.5 外觀：紅色固體 Ex/Em：553nm/570nm 推薦濾光器：XF23-Omega, 31002-Chroma 儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥，有效期12個(gè)月。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
生存素 (survivin) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進(jìn)口分裝 Anthraflavic acid 中文名：二羥蒽醌 分子式：C14H8O4
神經(jīng)營養(yǎng)素3 英文名稱： Neuroophin-3 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： -3 3-Hydroxychimaphilin 中文名：3-羥基梅笠草素 分子式：C12H10O3
神經(jīng)營養(yǎng)素 4(-4) 作用： ELISA 規(guī)格： 96T 3-Methyl-1-(2-piperidinophenyl)butylamine N-acetylglutamate salt 219921-94-5 中文名： 分子式：C23H37N3O5 度：98.0% 關(guān)鍵詞：
神經(jīng)營養(yǎng)素 4(-4) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進(jìn)口分裝 3-Methoxyfuran 3420-57-3 中文名： 分子式：C5H6O2
神經(jīng)營養(yǎng)素 3(-3) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進(jìn)口分裝 3-Methoxyfuran 3420-57-3 中文名： 分子式：C5H6O2 度：99.0% 關(guān)鍵詞： 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
丙谷二肽,L-丙-谷二肽,力肽 Ala-Gln 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR MouseVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor,VEGFR-3/Flt-4ELISA試劑盒小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
L-精甲酯二鹽酸 H-Arg-OMe·2HCl 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA試劑盒 ，英文名： MIP-1β/CCL4 ELISA Kit
D-丙氨酰胺鹽酸鹽 D-Alaninamide 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 大鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA檢測試劑盒RatAquaporin1,AQP-1ELISAKit 96T/48T
硝酸芬替康唑; 硝酸芬康唑 Fenticonazole Nitrate 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人催乳素釋放激素(PRH)試劑盒 Human PRH ELISA Kit
1-芐基D-谷 1-Benzyl D-Glutamate 質(zhì)量規(guī)格：0.98 RaeninELISAKit大鼠腎素(Renin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
D-苯丙 D-Phenylalanine 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR HIS釣餌(PULLDOWN)檢測試劑盒5
D-丙 D-Alanine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR MouseVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISA試劑盒小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
β-丙 β-Alanine 質(zhì)量規(guī)格：>98% 小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β(MIP1β)ELISA試劑盒 ，英文名： MIP1β ELISA Kit
β-丙(標(biāo)準(zhǔn)品) β-Alanine 質(zhì)量規(guī)格：>98%(T),標(biāo)準(zhǔn)品 人腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)ELISA檢測試劑盒Humannicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPHELISAKit 96T/48T
D-色 D-Tryptophan 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 大鼠血管生成素樣蛋白3(ANGPTL3)試劑盒 Rat Angiopoietin-like 3,ANGPTL3 ELISA KIT
CM-DiI活細(xì)胞染色劑組織基質(zhì)金屬（MMP-3）活性比色法定量檢測試劑盒
細(xì)胞基質(zhì)金屬（MMP-3）活性比色法定量檢測試劑盒
體液基質(zhì)金屬（MMP-3）活性熒光定量檢測試劑盒
組織基質(zhì)金屬（MMP-3）活性熒光定量檢測試劑盒
細(xì)胞基質(zhì)金屬（MMP-3）活性熒光定量檢測試劑盒
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
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