詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖:
下列是產(chǎn)品的訂購(gòu)信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號(hào) |
Alexa Fluor 488 NHS Ester (Succinimidyl Ester) | 1mg | GOY-F10229 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
本品是一種亮綠色熒光染料,具有水溶性和較強(qiáng)的pH穩(wěn)定性(pH4-10),可被488nm激發(fā)產(chǎn)生信號(hào)穩(wěn)定的熒光,常作為一種細(xì)胞標(biāo)記物偶聯(lián)到抗體、多肽、蛋白、示蹤劑和其他底物上廣泛用于細(xì)胞成像和檢測(cè)。 Alexa Fluor 488 NHS Ester,即含N-羥基琥珀酰亞胺(N-Hydroxysuccinimide)活化基團(tuán)的Alexa Fluor 488,可直接與生化分子上的氨基(-NH2)反應(yīng)形成穩(wěn)定的酰胺鍵,主要是伯胺,可用于標(biāo)記任何含伯胺的蛋白、多肽、氨基修飾的寡核苷酸或者其他含氨基的生物分子。 熒光團(tuán)(Fluorophore Label):Alexa Fluor 488 dye 活性基團(tuán)(Reactive Group):NHS ester 反應(yīng)性(Reactivity):伯胺(R-NH2) 分子式:C25H15Li2N3O13S2 分子量:643.4 外觀:粉末 Ex/Em:494/517 nm 摩爾吸光系數(shù):71,000 cm-1M-1 校正因子(CF280):0.11 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期3個(gè)月 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí),上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
乳酸(lacticacid)測(cè)定試劑盒(測(cè)血清、組織等)(比色法) Rhein 478-43-3 中文名:大黃酸 分子式:C15H8O6 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
肉毒桿菌(E/F型)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>) 48T Withaphysalin A 57423-72-0 中文名: 分子式:C28H34O6
肉毒桿菌(A/B型)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?/span>) 48T Withaphysalin A 57423-72-0 中文名: 分子式:C28H34O6 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
溶酶體相關(guān)膜蛋白3 英文名稱: Human Lysosomal Associated membrane protein 3 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: LAMP3 3-Acetyl-2,5-dichlorothiophene 36157-40-1 中文名: 分子式:C6H4Cl2OS 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
標(biāo)準(zhǔn)品 Standard for lysozyme Ranitidine 66357-59-3 中文名:鹽酸 分子式:C13H23ClN4O3S
雙甘氨二肽 Gly-Gly 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR Mouseα1-microglobulin,α1-MGELISA試劑盒小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
重組人胰島素 Human recombinant Insulin 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定 小鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CF)ELISA試劑盒 ,英文名: CF ELISA Kit
人胰島素 Human Insulin 質(zhì)量規(guī)格:測(cè)定用 大鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA檢測(cè)試劑盒Ratovariancancermarker-CA125ELISAKit 96T/48T
硝酸舍他康唑 Sertaconazole nitrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 人促睡眠肽(DSIP)試劑盒 Human delta sleep-inducing peptide,DSIP ELISA Kit
醋酸依降鈣素 Elcatonin Acetate 質(zhì)量規(guī)格:BR RatskeletalmuscleActinin-α,smActinin-αELISAKit大鼠橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α(smActinin-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
醋酸恩夫韋地 Enfuvirtide Acetate 質(zhì)量規(guī)格:BR,>98% HRP標(biāo)記一抗50微克
D-海藻糖無(wú)水 D-(+)-Trehalose Anhydrous 質(zhì)量規(guī)格:≥99%,BR Mouseα2-Aiplasmin,α2-APELISA試劑盒小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
二醋酸戈那瑞林(LH-RH) Gonadorelin Acetate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,二醋酸鹽 小鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CF)ELISA 試劑盒
醋酸戈舍瑞林 Goserelin Acetate 質(zhì)量規(guī)格:BR,>98% Rat platelet aibodies IgG/M/A (PA-IgG/M/A) ELISA Kit 大鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒
醋酸亮丙瑞林 Leuprolide Acetate 質(zhì)量規(guī)格:BR,>98% Humandeltasleep-inducingpeptide,DSIPELISAKit 人促睡眠肽(DSIP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Alexa Fluor 488-N-羥基琥珀酰亞胺酯血液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑盒
組織血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑盒
體液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
血液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))