產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
本試劑盒是整合cDNA第一鏈合成試劑(RT試劑盒)和即用型qPCR試劑而得的qRT-PCR試劑盒。cDNA第一鏈合成反應(yīng)和qPCR反應(yīng)分別在兩個(gè)離心管中進(jìn)行。 試劑盒特點(diǎn): 1.即開即用,足夠50次RT反應(yīng)(10μL體系)和50次qPCR反應(yīng)(20μL體系)。 2.RT和PCR分開進(jìn)行,方便優(yōu)化RT和qPCR條件,也方便一個(gè)RT反應(yīng)用于多個(gè)不同引物的qPCR擴(kuò)增。 3.RT mix中含除酶、模板和引物以外的RT成分,簡(jiǎn)化了反應(yīng)設(shè)置步驟。 4.qPCR mix是2×預(yù)配液,也簡(jiǎn)化了反應(yīng)設(shè)置步驟。 5.qPCR mix含qPCR染料,無(wú)需另外加入相關(guān)熒光PCR染料。 6.?dāng)U增效率高, 長(zhǎng)可擴(kuò)增5kbp以上的RNA。 7.提供定量PCR專用模板稀釋液,保證在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)低濃度樣品的準(zhǔn)確性。 保存條件:-20℃保存, 有效期一年。 自備試劑:樣品RNA、PCR引物、ROX染料 |
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DNA提取流程圖:
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)ELISAKit 2-Methylanthraquinone 84-54-8 中文名:2-甲基蒽醌 分子式:C15H10O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
人主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA試劑盒 2-Methylsulfanylpyrimidin-4(3H)-one 5751-20-2 中文名: 分子式:C5H6N2OS
人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類elisa試劑盒 人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類試劑盒、人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類 elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 2-Methyl-4-nitrobenzoic acid 1975-51-5 中文名: 分子式:C8H7NO4 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)ELISA試劑盒 2-Methylanthraquinone 中文名:2-甲基蒽醌 分子式:C15H10O2 度:98.0%
人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類elisa試劑盒 人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類試劑盒、人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類 elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 2-Methyl-4-nitrobenzoic acid 1975-51-5 中文名: 分子式:C8H7NO4
固深紅 GBC Fast Garnet GBC Salt 質(zhì)量規(guī)格:BS,90% Mouseβ-galactosidase,βGALELISA試劑盒小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
固紅 3 GL Fast Red 3 GL Salt 質(zhì)量規(guī)格:BS 小鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA 試劑盒
固紅 KL鹽 Fast Red KL Salt 質(zhì)量規(guī)格:BS Rat granzyme B (Gzms-B) ELISA Kit 大鼠顆粒酶B(Gzms-B)ELISA試劑盒
固紅B Fast Red B Salt 質(zhì)量規(guī)格:>90% Humanhistatin5ELISAKit 人富組蛋白(histatin5)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
固紅-萘磺酸 TR Fast Red TR Salt 1,5-naphthalenedisulfonate salt 質(zhì)量規(guī)格:≥90%(TLC) Humanaidiuretichormone/vasopressin/argininevasopressin,ADH/VP/AVPELISA試劑盒人抗利尿激素/血管加壓素/精加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
麗春紅S Ponceau S 質(zhì)量規(guī)格:BS 植物脊髓過氧化酶(MPO)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20
環(huán)丙貝特 Ciprofibrate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR HumanαLactalbumin,α-LaELISAKit人α乳清蛋白(α-La)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
曙紅Y(水溶) Eosin Y water solution 質(zhì)量規(guī)格:BS 小鼠降鈣素(CT)ELISA試劑盒 ,英文名: CT ELISA Kit
偶氮胭脂紅B Azocarmine B 質(zhì)量規(guī)格:IND 大鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratheatshockprotein70,hSP-70ELISAKit 96T/48T
偶氮胭脂紅G Azocarmine G 質(zhì)量規(guī)格:BS 人雌三(E3)試劑盒 Human Esiol,E3 ELISA Kit
兩步法RT-PCR熒光定量試劑盒細(xì)胞對(duì)氧磷酶2(PON2)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
血液對(duì)氧磷酶1(PON1)內(nèi)酯酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
組織對(duì)氧磷酶1(PON1)內(nèi)酯酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
血液對(duì)氧磷酶1(PON1)芳酯酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
組織對(duì)氧磷酶1(PON1)芳酯酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí),上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。