產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
本產(chǎn)品是利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的dNTP濃度、Mg濃度和MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。 產(chǎn)品特點(diǎn): 即開(kāi)即用,十分簡(jiǎn)單方便,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,實(shí)驗(yàn)人員在一定范圍內(nèi)可以控制突變率,一輪PCR的突變率范圍在2-8突變/1000bp,更高的突變率可以通過(guò)多輪PCR達(dá)到。 可用于連續(xù)易錯(cuò)PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯(cuò)PCR的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò)PCR的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。 可以擴(kuò)增的DNA片段更長(zhǎng),達(dá)到2kb,對(duì)于2kb以上的產(chǎn)物,建議分段擴(kuò)增。 保存:-20℃,有效期一年。 |
下列是產(chǎn)品的訂購(gòu)信息!產(chǎn)品僅用于科研
DNA提取流程圖:
圖
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
人脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP4)ELISA試劑盒 2-Chloro-1-(5'-(prop-1-ynyl)-2,2'-bithiophen-5-yl)ethanol 114916-00-6 中文名: 分子式:C13H11ClOS2 度:98.5% 關(guān)鍵詞: 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)
人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白elisa試劑盒 人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白試劑盒、人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 2-Chloro-11-cyclopentyl-5H-benzo[e]pyrimido[5,4-b][1,4]diazepin-6(11H)-one 中文名: 分子式:C16H15ClN4O 度:98.0%
人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(aFABP)ELISA試劑盒 2-Chloro-1-(5'-(prop-1-ynyl)-2,2'-bithiophen-5-yl)ethanol 114916-00-6 中文名: 分子式:C13H11ClOS2
人脂肪酸結(jié)合蛋白elisa試劑盒 人脂肪酸結(jié)合蛋白試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 人脂肪酸結(jié)合蛋白試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:人脂肪酸結(jié)合蛋白試劑盒、人脂肪酸結(jié)合蛋白elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 2-Chloro-11-cyclopentyl-5H-benzo[e]pyrimido[5,4-b][1,4]diazepin-6(11H)-one 中文名: 分子式:C16H15ClN4O
人脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP)ELISA試劑盒 2-Carbamoyl-3-hydroxy-1,4-naphthoquinone 中文名: 分子式:C11H7NO4 度:%
熒光素 Fluorescein 質(zhì)量規(guī)格:AR RatSolubleprotein-100B,S-100BELISAKit大鼠S100B蛋白(S-100B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鈣黃綠素 Calcein 質(zhì)量規(guī)格:IND IL蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25
瑞氏色素 Wright's stain 質(zhì)量規(guī)格:BS NudemouseAlpha-fetoprotein,AFPELISA試劑盒裸鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
吉氏色素,姬姆氏色素 Giemsa stain 質(zhì)量規(guī)格:BS 小鼠甲狀(T4)ELISA 試劑盒
6-FAM, SE;6-羧基熒光素琥珀酯 6-Carboxyfluorescein N-hydroxysuccinimide ester 質(zhì)量規(guī)格:0.9 Rat soluble Toll like receptor 6 (sTLR6) ELISA Kit 大鼠可溶性Toll樣受體6(sTLR6)ELISA試劑盒
6-FAM ;6-羧基熒光素 6-Carboxyfluorescein 質(zhì)量規(guī)格:0.95 HumanMannmabindinglectieceptor,MBLRELISAKit 人甘露糖凝集素受體(MBLR)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
5-FAM ;5-羧基熒光素 5-Carboxyfluorescein 質(zhì)量規(guī)格:>95% Humanai-exactablenuclearaigenaibody,ENA-AbELISA試劑盒人抗可提取核抗原抗體(ENA-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
黑色素(水溶) Nigrosine water soluble 質(zhì)量規(guī)格:BS 植物精(arginine)含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20
黑色素(溶) Nigrosin alcohol soluble 質(zhì)量規(guī)格:BS HumanVitaminD3,VD3ELISAKit人D3(VD3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
7-羥基;傘形花內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品) 7-Hydroxycoumarin 質(zhì)量規(guī)格:GC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甲狀腺球蛋白(TG)ELISA試劑盒 ,英文名: TG ELISA Kit
可調(diào)式易錯(cuò)PCR試劑盒藻類細(xì)胞鐵型亞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
真菌/酵母細(xì)胞鐵型亞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
植物鐵型亞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
藻類細(xì)胞亞硝酸鹽還原酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
真菌/酵母細(xì)胞亞硝酸鹽還原酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí),上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。