詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖:
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
Paraffin,PCR Grade | 10mL | GOY-F10261 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
本產(chǎn)品是PCR級石蠟油試劑,專門用于PCR擴增、WGA擴增等實驗時添加到反應(yīng)體系中,封閉反應(yīng)成分,防止溶液的揮發(fā)。 儲存條件:常溫運輸及保存,有效期一年。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
人粘膜相關(guān)上皮趨化因子elisa試劑盒 人粘膜相關(guān)上皮趨化因子試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 人粘膜相關(guān)上皮趨化因子試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:人粘膜相關(guān)上皮趨化因子試劑盒、人粘膜相關(guān)上皮趨化因子elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 2-Amino-N-(2-chloro-6-methylphenyl) thiazole-5-carboxamide 中文名: 分子式:C11H10ClN3OS 度:98.0%
人粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28)ELISA試劑盒 2-Aminophenyl phenyl sulfide 中文名:2-氨基二苯硫醚 分子式:C12H11NS
人粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28)ELISAKit 2-Aminofluorene 153-78-6 中文名:2-氨基芴 分子式:C13H11N 度:99.0% 關(guān)鍵詞:
人早老素2elisa試劑盒 人早老素2試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 人早老素2試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:人早老素2試劑盒、人早老素2 elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 2-Amino-N-(2-chloro-6-methylphenyl) thiazole-5-carboxamide 中文名: 分子式:C11H10ClN3OS
人游離前列腺特異性抗原(fPSA)ELISAKit 3-(Bromomethyl)-2-cyclopropyl-4-(4'-fluorophenyl)quinoline 中文名: 分子式:C19H15BrFN 度:98.0%
赤蘚紅;赤蘚紅B鈉鹽 Erythrosin B salt 質(zhì)量規(guī)格:BS Phaseolusvulgarisagglinin,PHAELISA試劑盒菜豆凝集素(PHA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
達(dá)拉菲尼,達(dá)帕菲尼 Dabrafenib,GSK2118436A 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRAFV600特異性抑制劑 小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA 試劑盒
乙酰檸檬酸三丁酯 Acetyl tributyl 質(zhì)量規(guī)格:>97% Rat soluble receptor activator of nuclear factor kappa B ligand (sRANKL) ELISA Kit 大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒
乙酰檸檬酸三乙酯 Triethyl acetyl 質(zhì)量規(guī)格:>99% Humaecombinationactivatinggene1,RAG-1ELISAKit 人重組激活基因1(RAG-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
海藻酸 Alginic acid 質(zhì)量規(guī)格:CP Humanai-gasicparietalcellaibody,AGPA/PCAELISA試劑盒人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
C棕櫚酸酯/L-抗壞血酸棕櫚酸酯 6-O-Palmitoyl-L-ascorbic Acid 質(zhì)量規(guī)格:0.99 植物賴(lysine)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒20
阿斯巴甜 Aspartame 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR HumanVitaminB6,VB6ELISAKit人B6(VB6)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
克拉維酸鉀 Potassium clavulanate 質(zhì)量規(guī)格:標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠甲腺原酸脫酶Ⅲ(DIO3)ELISA試劑盒 ,英文名: DIO3 ELISA Kit
刺槐素 ROBININ 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人彈性蛋白(Elastin)ELISA檢測試劑盒HumanElastinELISAKit 96T/48T
Amfebutamone 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,進口 大鼠凝血酶受體()試劑盒 Rat thrombin receptor, ELISA Kit
石蠟油,PCR級組織3-羥-3-甲戊二酰(HMG-COA)還原酶活性直接比色法
細(xì)胞3-羥-3-甲戊二酰(HMG-COA)還原酶活性直接比色法
血液乙醛脫氫酶4活性比色法定量檢測試劑盒
組織乙醛脫氫酶4活性比色法定量檢測試劑盒
細(xì)胞乙醛脫氫酶4活性比色法定量檢測試劑盒
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))