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詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖：
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
2×PCR MasterMix | 20μL×400次 | GOY-F10284 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
本制品中含有2×Taq DNA Polymerase，2×PCR Buffer，2×dNTP，只需加入適量引物、模板和水即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。大大簡化了PCR操作，使操作更加快捷，也減少了PCR操作過程中可能導(dǎo)致的污染，使PCR的重復(fù)性更好。 產(chǎn)品用途： 利用2×PCR Master Mix可以進(jìn)行各種常規(guī)的PCR擴(kuò)增，特別適合用于定性和半定量的PCR擴(kuò)增，以及2kb以下DNA片段的T載體克隆。 產(chǎn)品特點： 本產(chǎn)品可以擴(kuò)增出長達(dá)8kb的片段，但通常更適合用于擴(kuò)增2kb以下的DNA片段。 本產(chǎn)品穩(wěn)定性高，經(jīng)測試，反復(fù)凍融15次后對PCR的擴(kuò)增效果無顯著影響。 保存：-20℃，至少一年有效。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP/α1M)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human AMBP (Alpha-1-Microglobulin/Bikunin Precursor) ELISA Kit 2-Iodo-3-oxo-4-azaandrostane-17-carboxylic acid 104239-97-6 中文名： 分子式：C19H28INO3
人T細(xì)胞活化連接蛋白elisa試劑盒 人T細(xì)胞活化連接蛋白試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 人T細(xì)胞活化連接蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人T細(xì)胞活化連接蛋白試劑盒、人T細(xì)胞活化連接蛋白elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。 Sitafloxacin 127254-12-0 中文名：西他 分子式：C19H18ClF2N3O3
人P糖蛋白elisa試劑盒 人P糖蛋白試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 人P糖蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人P糖蛋白試劑盒、人P糖蛋白elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。 Schleicheol 1 中文名： 分子式：C30H52O2
人preptinelisa試劑盒 人preptin試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 人preptin試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人preptin試劑盒、人preptin elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。 Sulfamonomethoxine 38006-08-5 中文名：磺胺間甲氧鈉 分子式：C11H11N4NaO3S 度：98.0%
人Pirin蛋白(PIR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human PIR (Pirin) ELISA Kit 2-Fluoroadenosine 146-78-1 中文名： 分子式：C10H12FN5O4
滅草煙,咪唑 Imazapyr acid 質(zhì)量規(guī)格：>98% Rat soluble leptin receptor (sLR) ELISA Kit 大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒
咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品) Imazapyr acid 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 Humanadaptormoleculeapoptoticpeptidaseactivatingfactor1,APAF1ELISAKit 人銜接蛋白酶活化因子1(APAF1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
石膽酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Lithocholic Acid 質(zhì)量規(guī)格：>97(GC),標(biāo)準(zhǔn)品 Humanai-hepatitisDvirusaibody,ai-HDVELISA試劑盒人抗丁型肝炎病毒抗體(ai-HDV)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
氧嗪酸鉀 Potassium Oxonate 質(zhì)量規(guī)格：>98% 植物0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性比色法定量檢測試劑盒20
氧嗪酸鉀(標(biāo)準(zhǔn)品) Potassium Oxonate 質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 HumanVascuolarcelladhesionmolecule1，VCAM-1ELISAKit人血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
異丁司特 Ibudilast 質(zhì)量規(guī)格：>98% 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)ELISA試劑盒 ，英文名： MMP-5 ELISA Kit
異丁司特(標(biāo)準(zhǔn)品) Ibudilast 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠血紅素氧合酶2(HO-2)ELISA檢測試劑盒Rathemeoxygenase2,HO-2ELISAKit 96T/48T
吉西他濱 Gemcitabine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,free base 人0酸化微管相關(guān)蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)試劑盒 Human hyper phosphorylated MAPT ELISA kit
沙利度胺（反應(yīng)停） Thalidomide 質(zhì)量規(guī)格：>98% RatThioredoxin,xELISAKit大鼠硫氧化還原蛋白(x)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
沙利度胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Thalidomide 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 LAMBDA噬菌體DNA氯化銫化試劑盒10
PCR MasterMix細(xì)菌胱硫醚-γ-合成酶（cystathionine γ-synthase；CGS）活性熒光定量檢測試劑盒
組織胱硫醚-γ-合成酶（cystathionine γ-synthase；CGS）活性熒光定量檢測試劑盒
細(xì)胞胱硫醚-γ-合成酶（cystathionine γ-synthase；CGS）活性熒光定量檢測試劑盒
植物胱硫醚-γ-合成酶（cystathionine γ-synthase；CGS）活性比色法定量檢測試劑盒
真菌/酵母胱硫醚-γ-合成酶（cystathionine γ-synthase；CG
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
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