詳細介紹
DNA提取流程圖:
下列是產品的訂購信息!產品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 貨號 |
SP6 in vitro Transcription Kit | 50次 | GOY-F10294 |
產品詳細介紹:
本試劑盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA體外轉錄試劑盒,它利用含有SP6啟動子的模版DNA,以NTP為底物,從SP6啟動子下游開始合成與模版DNA中一條鏈互補的RNA,簡單快速獲得大量的RNA分子。 產品特點: 即開即用,用戶只需提供含SP6啟動子的DNA模板即可以進行體外轉錄實驗,不需要單獨準備每一個成份。 單溶液預配液,減少加樣次數,避免了操作誤差,增加了可重復性。 模版DNA可以是線性化的質粒DNA,也可以是PCR擴增產物。 可以合成的RNA的佳長度在20nt到2000nt之間。 產品配方經過精心優(yōu)化,每μg DNA模版可以合成2~6μg RNA。 得到的RNA可以用于RNA結構研究、核酶生物化學、體外翻譯、RNA-蛋白質相互作用、反義技術、SELEX技術和RNA干擾(RNAi)等實驗。 保存:-20℃,有效期一年。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養(yǎng)板面積而定,不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質,脂肪,多糖或胞外物質(肌肉,植物結節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中,如要分離DNA和蛋白質可保留有機相,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。
檸檬酸(CA)含量測試盒 可見分光光度法 50管/48樣 Rizatriptan benzoate 145202-66-0 中文名:苯甲酸利扎曲坦 分子式:C22H25N5O2
鎳快速測試盒 Nickel rapid test case Ranitidine 66357-35-5 中文名: 分子式:C13H22N4O3S 度:98.0% 關鍵詞:
鎳測試盒 Nickel test case 4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester 中文名: 分子式:C16H16N4O3 度:98.0%
尿酸含量測試盒 可見分光光度法 50管/48樣 Tropisetron 105826-92-4 中文名:鹽酸托烷司瓊 分子式:C17H21ClN2O2
尿激酶型纖溶酶原激活因子受體 (uPA-R) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝 O-Benzyl-L-tyrosine 16652-64-5 中文名:O-芐基-L-酪 分子式:C16H17NO3
戴斯-馬丁氧化劑 Dess-Martin periodinane 質量規(guī)格:>95% HumanVascularEndothelialcellGrowthFactorD,VEGF-DELISAKit人血管內皮細胞生長因子D(VEGF-D)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
西多福韋 Cidofovir 質量規(guī)格:>98%,BR,可用于細胞培養(yǎng) 小鼠基質金屬蛋白酶12(MMP12)ELISA試劑盒 ,英文名: MMP12 ELISA Kit
4-氨基-5-咪唑甲酰胺 5-Amino-4-imidazolecarboxamide 質量規(guī)格:>98%(滴定) 人脂0壁酸(LTA)ELISA檢測試劑盒Humanlipoteichoicacids,LTAELISAKit 96T/48T
TNP 470/O-(氯乙酰氨甲?;?/span>)煙曲 AGM-1470 質量規(guī)格:≥97% 大鼠細胞因子信號轉導抑制因子3(SOCS-3)試劑盒 Rat suppressors of cytokine signaling 3,SOCS-3 ELISA Kit
牛磺石膽酸鈉(進分) taurolithocholate 質量規(guī)格:≥97%進口分裝 英文名稱RatAndrostenedioneELISAKit大鼠雄烯二同(ASD)規(guī)格:96T/48T
甘氨鵝脫氧膽酸 glycochenodeoxycholic acid (GCDCA) 質量規(guī)格:>97% 果菜纖維素酶解法定量檢測試劑盒10
?;秦i去氧膽酸鈉 taurohyodeoxycholate hydrate 質量規(guī)格:≥98%,美國進口 ELISAKitPDGF-AB人血血小板衍生生長因子AB規(guī)格:48T/96T
磺丁基-β-環(huán)糊精;磺丁基醚倍他環(huán)糊精鈉 Captisol( beta-Cyclodextrin, sulfobutyl ethers, salts) 質量規(guī)格:>99%,USP 小鼠基質金屬蛋白酶10(MMP10)ELISA試劑盒 ,英文名: MMP10 ELISA Kit
纈氨 Valinomycin 質量規(guī)格:>95% (HPLC),進分 人游離原卟啉(FEP)ELISA檢測試劑盒HumanFreeerythrocyteproloporphyrin,FEPELISAKit 96T/48T
5-氯-1,3-二甲基吡唑 5-Chloro-1,3-dimethyl-1H-pyrazole 質量規(guī)格:>98%, 大鼠細胞因子信號轉導抑制因子1(SOCS-1)試劑盒 Rat suppressors of cytokine signaling 1,SOCS-1 ELISA Kit
SP6體外轉錄試劑盒細胞半胱-8(CASPASE-8)活性比色法定量檢測試劑盒
組織半胱-7(CASPASE-7)活性熒光定量檢測試劑盒
細胞半胱-7(CASPASE-7)活性熒光定量檢測試劑盒
組織半胱-7(CASPASE-7)活性比色法定量檢測試劑盒
細胞半胱-7(CASPASE-7)活性比色法定量檢測試劑盒
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)