詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:豬腺病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Porcine Adenovirus(Swine Adenovirus)
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
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實驗過程:
一、豬腺病毒探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當(dāng)于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(yīng)(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù),則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。
11. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品:
ZLigustilide胰高血糖素樣肽1檢測試劑盒20mg
白細(xì)胞激活黏附因子(ALCAM)重組蛋白英文名稱:Recombinant Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule (ALCAM)
轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 ERK3 / MAPK12 / P38-gamma 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)*250(g)
人CD14Coronin 1a 肌動蛋白結(jié)合蛋白CORO1A抗體規(guī)格:96T/48TAzathioprine規(guī)格:500mgToll樣受體4檢測試盒0.5mL人乳腺癌細(xì)胞,MDAMB435s細(xì)胞1x10^6cells
6gingerol胰高血糖素樣肽1受體檢測試劑盒20mg
穿心蓮內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Andrographolide
脫氫酶酶(PDP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 BBOX1 / Gamma-BBH 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)*250(g)
人CD163Nitrotyrosine 硝基酪氨抗體規(guī)格:96T/48T規(guī)格:20mgToll樣受體6檢測試盒10mg人乳腺癌細(xì)胞,MDAMB435細(xì)胞1x10^6cells
99%100g100mg溶葡球酶TrimethylamineN oxide
Α-香樹脂 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg ELISA Kit for Human Cadherin-7小鼠活化素B(ACV-B)ELISA試劑盒,英文名:ACV-B ELISA Kit
CPeptide( CPEP ) C肽(C肽)*脯氨羥化酶檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒498077
97%5g5g溶酶(蛋清)Anti Neisseria Gonorrhea
泊金丁 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 3號染色體開放閱讀框59抗體 Col Ⅰ ELISA Kit Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)ELISA試劑盒
CR (Calretinin) 鈣結(jié)合蛋白(抗原)進口、分裝型肝炎病IgG抗體檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒498077
97%25g1g溶酶(蛋清)MLH3
四氧化三鈷(>99%,BR) 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR Cobalt (II, III ) oxide 大鼠軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
CRP (Creactive protin) C反應(yīng)蛋白(抗原)進口、原裝顆粒酶K檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒49843983
豬腺病毒探針法熒光定量PCR試劑盒地奧司明 CAS號: 520274 規(guī)格: HPLC≥95%;20mg 訂購|咨詢
貝母辛 CAS號: 19773241 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
白花前胡素 CAS號: 72463775 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
白花前胡素 CAS號: 73069257 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
(R型)人參皂苷Rh2 CAS號: 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
仙茅苷 CAS號: 85643192 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
對葉百部堿 CAS號: CAS:6879012 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
紫云英苷 CAS號: 480104 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
異葒草苷 CAS號: 4261421 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
葒草苷 CAS號: 28608755 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
野百合堿 CAS號: 315220 規(guī)格: HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢
桔梗皂苷D CAS號: 58479688 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
吉馬 CAS號: 6902916 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
異鉤藤堿 CAS號: CAS:6859014 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
鉤藤堿 CAS號: 76664 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢