詳細介紹
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:海藻巴斯德菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Pasteurella trehalosi
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
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實驗過程:
一、海藻巴斯德菌探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2.產(chǎn)品僅用于科研對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品:
Sennoside A異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A1檢測試劑盒0.2ml
大鼠淋巴成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL
Sennoside AL-精氨標準品規(guī)格:規(guī)格:人載脂蛋白L1(Apolipoprotein L1)ELISA試劑盒 0.2ml
MSTN(rat Myostatin) ELISA Kit 大鼠肌抑素 ELISA 試盒CAS號:628462 羧基纖維素酶檢測試盒100uHuman/人Elisa試盒31008647
Honokiol異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A2/B1檢測試劑盒0.1ml
木犀草素(標準品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 Luteolin
Sennoside B鹽精氨標準品規(guī)格:規(guī)格:人多藥耐藥相關蛋白4(MRP4)ELISA試劑盒 0.2ml
MLZE(Human melanomaderived leucine zipper extranuclear factor) ELISA Kit 人黑素瘤衍生亮氨拉鏈額外核子CAS號:597451β葡聚糖苷酶檢測試盒10uHuman/人Elisa試盒31008647
97%100g1g酰輔酶Agiardiasis antigen
中國藍薔薇瓊脂250克國產(chǎn)/進口
肽基脯氨異構酶酶FKBP25檢測試盒20mg肝素化血漿總脂解酶檢測試盒heparinbindingepidermalgrowthfactorlikegrowthfactor
97%500g250mg酰輔酶AFibrinogenlike protein 1
殺蟲脲(標準品) 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 Triflumuron
Peptone From SoybeanBR鈣鎂ATP酶檢測試盒20mg肝素結合性表皮生長子檢測試盒hepatocytegrowthfactor
包含 <2% BHT穩(wěn)定劑,98%25g1g糖化酶Progesterone Receptor
化高鐵血紅蛋白參比液(150g/L)/Cyanomethemoglobin reference solution10毫升×8支國產(chǎn)/進口
PolypeptoneBR多胺β羥化酶檢測試盒20mg肝細胞生長子檢測試盒hepaticlipase
海藻巴斯德菌探針法熒光定量PCR試劑盒長春堿 CAS號: 143679 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
降二辣椒堿 CAS號: 28789357 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
馬兜鈴內(nèi)酰A CAS號: 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
馬兜鈴B CAS號: 475809 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
馬兜鈴A CAS號: 313677 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
蟾毒配 CAS號: 465394 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
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木蘭脂素 CAS號: 6859661 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
異水飛薊賓 CAS號: 72581716 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
水飛薊寧 CAS號: 29782681 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
水飛薊汀 CAS號: 33889699 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
莪術 CAS號: 17910097 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
人參皂苷Rk2 CAS號: 規(guī)格: HPLC≥95%;20mg 訂購|咨詢
葫蘆巴堿 CAS號: 535831 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
蘋果 CAS號: 6915157 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢