差異支原體探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。

【產(chǎn)品名稱】差異支原體探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Mycoplasma dispar
【產(chǎn)品編號】YSP6973
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測，所用儀器為實時熒光PCR儀，可通過實時擴增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗原理】
本試劑盒采用實時熒光PCR技術(shù)，針對鴨源性成分核酸序列設(shè)計特異性引物和熒光探針，通過實時熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對鴨源性成分核酸進行定性檢測。
*的擴增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴增效率。以相同量的293T細胞cDNA為模板，擴增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴增信號更強，擴增效率更高。
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PCR實驗方法步驟：
差異支原體探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟	溫度	時間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	5   min	1
變性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
終延伸	72℃	5   min	1

實驗步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴增。其要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。
Alphalipoic acid整合素A5檢測試劑盒20mg

醋普蘭林肽 質(zhì)量規(guī)格：純度≥98.0%  Pramlintide Acetate 尿道定位顯色培養(yǎng)基/Urine Orientation Chromogenic Medium分離和鑒別常見尿道致病菌1升國產(chǎn)/進口

Glucosamine Hydrochloride前列地爾標準品規(guī)格：規(guī)格：人和肽素(CPP)Polyclonal Antibody 0.2ml

TnT(Human Troponin T) ELISA Kit  人肌鈣蛋白TCAS號：11680 脂多糖檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒30484776

Caffeic acid整合素α2檢測試劑盒10mg

異鼠李素-3-O-葡萄糖苷  英文名稱：Isorhamnetin -3-O- glucoside   保存：-20℃   規(guī)格：HPLC≥98% 20mg/支 兔抗甲狀腺球蛋白

Rotundine六密標準品規(guī)格：規(guī)格：人膜聯(lián)蛋白-A3 Polyclonal Antibody 0.2ml

ESAb(Human antiEndostatin antibody) ELISA Kit  人血管內(nèi)皮抑素抗體CAS號：1105067886β葡聚糖檢測試盒1kgHuman/人Elisa試盒304851998

5(6)羧基四基羅丹明（混合物）5mg

糖精鈉 水合物(標準品) 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品 Saccharin sodium salt hydrate

Rabbit Antihuman IgG Whole serum  兔抗人IgG抗血清現(xiàn)貨供應(yīng)己糖激酶1檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒4836139

6羧基羅丹明110琥珀酰亞（單一化合物）5mg

 萬古霉素(改良月桂基鹽胰蛋白胨肉湯凍干配套試劑) 規(guī)格： 10支/盒 用途： 每支添加于100ml（022212）中配成MLST

Rabbit Antihuman IgM Whole serum  兔抗人IgM抗血清*蛋白酪氨酶非受體型11檢測試盒25gHuman/人Elisa試盒4837881

5羧基羅丹明110琥珀酰亞（單一化合物）5mg

標準溶液(0.05000mol/L(0.1N)) 質(zhì)量規(guī)格：0.05000mol/L(0.1N) Iodine solution

Rabbit Antihuman IgA Whole serum  兔抗人IgA抗血清進口、分裝葡萄糖6異構(gòu)酶檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒4837881
差異支原體探針法熒光定量PCR試劑盒穿心蓮內(nèi);Andrographolid CAS號： 5508587 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

刺五加苷B;Eleutheroside CAS號： 118343 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

刺五加苷E;Eleutheroside CAS號： 39432569 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

橙黃決明素;Aurantioobtus CAS號： 67979253 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

橙皮苷;Hesperidin CAS號： 520263 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

川續(xù)斷皂苷;dipsacoside B CAS號： 33289859 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

草烏素;Bulleyaconitine CAS號： 107668791 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

長春新堿;Vincristine CAS號： 57227 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

長春花堿;Vinblastine CAS號： 865214 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

長春質(zhì)堿;Catharanthine CAS號： 2468215 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

白果雙黃;Bilobetin CAS號： 521324 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

3表熊果;3Epiursolic CAS號： 989300 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

()白雀木;LQuebrachi CAS號： 642386 規(guī)格： 10mg 訂購|咨詢

八姜黃素;octahydrocurcu CAS號： 36062074 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

白楊素7葡萄糖醛苷;Chrysin CAS號：  規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。