詳細介紹
產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:腸致病性大腸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Enteropathogenic E.coli(EPEC)
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX(根據(jù)機型決定,具體見使用方法)。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設(shè)置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設(shè)置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。
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實驗過程:
一、腸致病性大腸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2.產(chǎn)品僅用于科研對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品:
Human Rhinovirus 14 人鼻病毒14 LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Human Rhinovirus 16 人鼻病毒16 LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Human Rhinovirus 1B 人鼻病毒1B LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Human Rhinovirus 29 人鼻病毒29 LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Human Rhinovirus 9 人鼻病毒9 LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Human Rhinovirus 人鼻病毒通用LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Human T-cell Lymphoma Virus 1(HTLV-1)人類嗜T淋巴細胞病毒1型RT-LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Human T-cell Lymphoma Virus 2(HTLV-2)人類嗜T淋巴細胞病毒2型RT-LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Human T-cell Lymphoma Virus Provirus 人類嗜T淋巴細胞病毒前病毒通用LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Human T-cell Lymphoma Virus Provirus(HTLV-1)人類嗜T淋巴細胞病毒1型前病毒LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Human T-cell Lymphoma Virus Provirus(HTLV-2)人類嗜T淋巴細胞病毒2型前病毒LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Human T-cell Lymphoma Virus(HTLV)人類嗜T淋巴細胞病毒通用RT-LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Hyaloma spp.眼蜱通用LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
Hyostrongylus rubidus紅色豬圓線蟲LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細菌,化能異養(yǎng),嚴格好氧,氧化代謝。纖維素降解菌
Hypoderma bovis牛皮蠅蛆LAMP試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌,形成芽孢。
腸致病性大腸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒ZnT3抗體(25ul) Anti-ZnT3
ZnT3抗體(0.2ml) Anti-ZnT3
ZNF687抗體(N末端) ZNF687 Antibody (NT) (Zinc finger protein 687, RP11-126K1.3)
ZNF687抗體(C末端) ZNF687 Antibody (CT) (Zinc finger protein 687, RP11-126K1.3)
ZNF521抗體(N末端) ZNF521 Antibody (NT) (Zinc finger protein 521, EHZF, Evi3)
ZNF521抗體(C末端) ZNF521 Antibody (CT) (Zinc finger protein 521, EHZF, Evi3)
ZIPK抗體 ZIPK Antibody (DAPK3, FLJ36473, ZIP, ZIPK, death-associated protein kinase 3)
ZIP3抗體(50ul) Anti-ZIP3
ZIP3抗體(25ul) Anti-ZIP3