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          多重?zé)晒饷庖呓M化Q&A(第四彈)

          閱讀:539      發(fā)布時(shí)間:2024-2-28
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          簡介

           

          多重?zé)晒饷庖呓M化技術(shù)(簡稱多色)基于酪氨酸信號放大 (Tyramide dignal amplification,TSA) 技術(shù),是一類利用辣根過氧化酶 (HRP) 對靶蛋白或核酸進(jìn)行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法。

           

          帶有染料標(biāo)記的底物酪胺分子在過氧化氫氧化環(huán)境下,被抗體或探針固定的HRP轉(zhuǎn)化為具有短暫活性的中間狀態(tài),然后被激活的中間態(tài)分子迅速與相接蛋白分子的富含電子區(qū)域(酪氨酸殘基)進(jìn)行穩(wěn)定的共價(jià)結(jié)合。

           

          圖1 酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(yīng)

           

          為什么選擇多色?多色技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)

           

          1、同時(shí)標(biāo)記多種蛋白(最多9標(biāo)10色);

          2、一抗來源不再受限(同種屬多標(biāo));

          3、連接辣根過氧化物酶的同種屬二抗;

          4、強(qiáng)熒光防淬滅。

           

          本期主要講解客戶對說明書的一些疑惑,說明書常見問題一網(wǎng)打盡?。?!

           

          圖2 愛必信多色試劑盒

           

          重要提示?。?!

           

          新的一年愛必信部分多色試劑盒染料和抗體更新,例如舊版本TSA520外觀是白色透明新版本是黃色,老用戶不要誤會染料質(zhì)量問題!

          版本更新之后,新舊試劑盒請不要摻雜,試劑盒需配套使用!

           

          圖3 新版染料TSA520

           

          愛必信多色試劑盒說明書問題解析

           

          1、脫蠟水合步驟中10%中性福爾馬林浸片10min,滅菌水洗片1min,重復(fù)3次"目的是什么?我們以前做石蠟切片的時(shí)候沒有這一步。

           

          答:這是后固定的步驟,固定充分的組織可以省略此步。

           

          2、微波修復(fù)抗原每一輪染色都要做嗎?可以用抗體洗脫液替代嗎?抗體洗脫液用在哪個(gè)步驟?

           

          答:染第一個(gè)抗體之前做抗原修復(fù),是為了使被石蠟或者固定劑封閉的抗原決定簇重新暴露出來,使得抗體能夠識別到抗原;在染后面每一個(gè)抗體之前的抗原修復(fù),目的是為了去除掉上一輪染色的抗體和殘留沒有結(jié)合上的染料,其實(shí)更準(zhǔn)確的叫法是“抗體洗脫",也就是說第一次的抗原修復(fù)是真正的抗原修復(fù),后面的抗原修復(fù)實(shí)際上是“抗體洗脫",“抗體洗脫"可以用抗體洗脫液(abs994)替換,特別是細(xì)胞、冰凍切片或者骨樣本,但第一次抗原修復(fù)不能被抗體洗脫液替代,冰凍切片可以不進(jìn)行抗原修復(fù),染色效果欠佳時(shí),可以考慮嘗試進(jìn)行抗原修復(fù),推薦冰凍切片快速抗原修復(fù)液(5×)(abs9207)。

           

          3、需要進(jìn)行內(nèi)源性過氧化氫封閉嗎?在哪一步進(jìn)行?是每輪都要做嗎?

           

          答:需要進(jìn)行內(nèi)源性過氧化氫封閉,詳細(xì)的步驟是在血清封閉之前,3%的過氧化氫甲醇溶液室溫封閉10-15min,PBST洗三遍,再加血清封閉,過氧化氫封閉做一次就好了。

           

          4、染DAPI之前是否還需要進(jìn)行抗原修復(fù)(指抗體洗脫)?

           

          答:理論上是需要的,但是如果是冰凍切片經(jīng)過多輪洗脫之后,有很大的脫片風(fēng)險(xiǎn),這種情況下,寧愿背景不太干凈,也不希望脫片,這一步可以不進(jìn)行抗原修復(fù)。

           

          多色試劑盒買二送一!??! 活動(dòng)時(shí)間:2024年2月20日-3月31日


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          abs50015

          七色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒(鼠兔通用二抗)

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          七色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒(plus)(鼠兔通用二抗)

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          七色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒(抗兔二抗)

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          七色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒(plus)(抗兔二抗)

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          abs50049

          六色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒(plus)(鼠兔通用二抗)

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          六色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒(抗兔二抗)

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          abs50048

          六色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒(plus)(抗兔二抗)

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          五色多重?zé)晒饷庖呓M化染色試劑盒(抗兔二抗)

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          Absin特色產(chǎn)品線:

          WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動(dòng)劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

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