實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 TM3 (小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞) 別稱TM-3 種屬小鼠 年齡(性別)雄性,11-13天 組織來源睪丸間質(zhì) 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述TM3細(xì)胞在LH作用下cAMP產(chǎn)量升高,但對促卵泡激素沒有響應(yīng)。TM3細(xì)胞對LH的響應(yīng)持續(xù)時間與血清批次有關(guān);在LH存在下,TM3細(xì)胞可以代謝膽固醇。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM/F12+5% HS+2.5% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ 致瘤性No, The cells were not tumorigenic in immunosuppressed mice, but did form colonies in semisolid medium. 受體表達情況luteinizing hormone (LH); epidermal growth factor (EGF); androgen receptor, positive; e種屬ogen receptor, positive; progesterone receptor, positive 基因表達情況prostaglandin F2a 注意事項該細(xì)胞貼壁松散,操作時請盡量輕柔;換液時需預(yù)熱培養(yǎng)基;收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團,為正?,F(xiàn)象,請按照收貨注意事項處理。 |
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
牛窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
β-轉(zhuǎn)導(dǎo)素重復(fù)序列包含蛋白(BTRC)免疫試劑盒進口、組裝
蛋白體(prosome,macropain)亞基,β型,1(PSMB1)免疫試劑盒進口、分裝
大鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)免疫試劑盒進口、分裝
犬胰島素樣因子3(INSL3)免疫試劑盒進口、組裝
CXC趨化因子受體7(CXCR7)免疫試劑盒*直銷
低密度脂蛋白(LDL)免疫試劑盒*直銷
馬皮質(zhì)酮(CORT)免疫試劑盒進口、組裝
總蛋白S(TPS)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
小鼠RAR的相關(guān)孤獨受體C(RORC)免疫試劑盒進口、組裝
TM3 (小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞)2 ug pCMV-SPORT6 SNAP25 pCMV-SPORT6 SNAP25 低溫運輸,-20℃保存
波爾頓選擇性肉湯 Bolton Broth 250g
2 ug pN3 pN3 低溫運輸,-20℃保存
50T 溶血性鏈球菌ACR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
1 g L-Citrulline(NO中間體) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
25mL E.coli Sample Buffer E.coli Sample Buffer 常溫保存
100mL BLOTTO溶液 BLOTTO Solution -4℃保存(不能保存在-20℃)