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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-22 16:05:44瀏覽次數(shù)：243
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X1289 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 大鼠頜骨成纖維細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1289 |
商品介紹：
名稱 大鼠頜骨成纖維細(xì)胞 2.組織來(lái)源：頜骨組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 大鼠頜骨成纖維細(xì)胞分離自頜骨組織；頜骨，是指頜部的骨頭，分為上頜骨和下頜骨。構(gòu)成口腔上下部的骨頭和肌肉組織，上部叫上頜，下部叫下頜。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠頜骨成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠頜骨成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R204 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 CNDP2 / CN2 / CPGL 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 TLR3 / CD283 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
PTGS2 / COX2 / PGHS-2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
PRKD2 / PKD2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
TRIB2 / TRB2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 SerpinB12 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
小鼠 VEGFA / VEGF164 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
CDC37 / CDC37A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
EGFL7 / VE-statin 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
RBBP4 / RBAP48 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠頜骨成纖維細(xì)胞溶血磷脂酸?；D(zhuǎn)移β抗體Human immunoglobulin kappa ELISA Kit大鼠高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA試劑盒,
AFP4b蛋白抗體Human IGBP1 ELISA Kit大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α（PDGFsR-α）ELISA試劑盒,
載脂蛋白C2抗體Human IMP3(U3 small nucleolar ribonucleoprotein protein IMP3) ELISA Kit豚鼠白介素6（IL-6）ELISA試劑盒,
載脂蛋白A5抗體Human IMPAD1 ELISA Kit豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體（VE-cad）ELISA試劑盒,
載脂蛋白A2抗體Human IMP4 ELISA Kit鴨病性腸炎?。―EV）ELISA試劑盒,
溶血磷脂酸?；D(zhuǎn)移D抗體Human IGF2BP2(insulin-like growth factor 2 mRNA binding protein 2) ELISA Kit綿羊白介素6（IL-6）ELISA試劑盒,
載脂蛋白E3抗體Human IGF2BP1(Insulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 1) ELISA Kit植物乙酸（IAA） ELISA試劑盒,
ABI基因家族2抗體Human IMP5 ELISA Kit生長(zhǎng)釋放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人
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