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詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1281 |
商品介紹：
名稱 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 2.組織來源：脂肪組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時(shí)可迅速分解成甘油和脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內(nèi)皮功能、纖溶活動(dòng)及炎癥反應(yīng)，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量儲(chǔ)存的器官而成為一個(gè)極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)。脂肪組織中也存在一些干細(xì)胞群，具有自我更新能力和多向分化潛能，被稱為脂肪組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞，簡稱脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比，在來源、細(xì)胞群特點(diǎn)以及分化潛能等多方面極為相似。但是，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞更易獲得足夠數(shù)量的細(xì)胞，且獲取過程中對(duì)機(jī)體損傷更小，是更為理想的自體干細(xì)胞源。脂肪組織分離得到脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞以梭形為主要形態(tài)，BrdU可標(biāo)記其細(xì)胞核。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)CD29、CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-H202 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
USP5 / ISOT 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
SerpinB9 / CAP-3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
beta-Catenin / CTNNB1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
Peroxiredoxin 2 / PRDX2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 EGFL7 / VE-statin 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
STK23 / MSSK1 / SRPK3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
PTPN2 / TC-PTP (aa 1-314) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
Midkine / MDK 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
CDC42BPB 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
RET Kinase (aa 658-1114) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞溴化亞銅 AR,99.0%二茂鐵甲 98%Anti-HO-1/HSP32/FITC 熒光素標(biāo)記血紅素氧合-1/熱休克蛋白-32抗體IgG
溴化亞銅 CP,99.0%5-氟酮 98%Anti-HO-1/HSP32/FITC 熒光素標(biāo)記血紅素氧合-1/熱休克蛋白-32抗體IgG
溴化亞銅 99.99% metals basis5-羥基 98.0%Anti-HO-2/FITC 熒光素標(biāo)記血紅素氧合-2抗體IgG
化亞銅 AR,99.5%潮霉素B 超純級(jí)Anti-HOXA10 /FITC 熒光素標(biāo)記HOXA10抗體IgG
咪唑-4，5-二羧酸 98%六羰基鎢 99.9% metals basisAnti-HOXB4/FITC 熒光素標(biāo)記HOXB4抗體IgG
2-巰基苯并咪唑 98%六羰基鎢 97%Anti-PSGD/HOXB13/FITC 熒光素標(biāo)記同源盒蛋白HOXB13抗體IgG
6-并咪唑 98%氫化 97%Anti-HOXc8/FITC 熒光素標(biāo)記同源盒基因的一種抗體IgG
胡椒基丁 95%氫化鈉 98%Anti-Hpt/HP /FITC 熒光素標(biāo)記結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗體IgG
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