化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠睪丸間質(zhì)細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1295 |
商品介紹：
名稱 大鼠睪丸間質(zhì)細胞 2.組織來源：睪丸組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠睪丸間質(zhì)細胞分離自睪丸組織；睪丸間質(zhì)細胞成群分布在曲精小管之間，胞體呈圓形，橢圓形或不規(guī)則形，胞體較大，直徑約20μm，胞質(zhì)呈嗜酸性，細胞核呈圓形或卵圓形，常位于中央，染色較淡，有1～2個核仁線粒體多，呈管嵴狀，無分泌顆粒。從青春期開始，睪丸間質(zhì)細胞受垂體前葉嗜堿性細胞分泌的間質(zhì)細胞刺激素（黃體生成素）的作用，能合成分泌雄性激素，可促進的發(fā)生和男性生殖器官發(fā)育，以及維持第二性征和性功能。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠睪丸間質(zhì)細胞采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實驗室分離的大鼠睪丸間質(zhì)細胞經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R206 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/14/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SMPD1 / ASM 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PLK1 / PLK-1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
ANGPTL5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SMYD2 / KMT3C 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
XRP2 / RP2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
OXSR1 / OSR1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CDK2 / p33 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PTK6 / Brk 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PARP-1 / PARP 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠睪丸間質(zhì)細胞Devosia yakushimensis葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白-78檢測試劑盒
Dokdonella fugitiva葡萄糖氧化檢測試劑盒
Dokdonella ginsengisoli葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽檢測試劑盒
Duganella zoogloeoides葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1檢測試劑盒
Donghicola xiamenensis葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4檢測試劑盒
Dongia mobilis前列環(huán)素檢測試劑盒
Duganella violaceinigra前列環(huán)素檢測試劑盒
Dyadobacter alkalitolerans前列腺素B2檢測試劑盒
化工儀器網(wǎng)