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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| A875 [A-875] (黑色素瘤細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0253 |
商品介紹：
名稱 A875 [A-875] (黑色素瘤細(xì)胞) 種屬人類 年齡（性別）40歲 組織來源未知 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)多角形 背景描述A875細(xì)胞NGF受體陽性，可用于建立動物研究模型。 生長培養(yǎng)基MEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
實(shí)驗要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
豬白蛋白免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
蜥蜴孕激素/孕酮(PROG)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
大鼠成纖維細(xì)胞生長因子10(FGF10)免疫試劑盒*直銷
大鼠趨化因子(FK)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
Wnt-3a蛋白(WNT3A)免疫試劑盒*直銷
抗磷脂酰乙醇胺抗體(IgM)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
大鼠解整合素樣金屬蛋白8(ADAM8)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
小鼠白三烯D4(LTD4)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
小鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
山羊促甲狀腺素(TSH)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
A875 [A-875] (黑色素瘤細(xì)胞) 250mL PIPES Buffer，1.0M, pH7.4 PIPES Buffer，1.0M, pH7.4 常溫保存
100mL 大腸桿菌零誘導(dǎo)培養(yǎng)基
2 ug pPICZα E pPICZα E 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
果糖（腦膜炎奈瑟氏菌專用） 20ml/支
2 ug pBV 220 pBV 220 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
霍亂雙糖鐵瓊脂(KIA) KIA 250g
1g 異丙基 -β-D- 硫代半乳糖苷 IPTG 4℃避光保存
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