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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 小鼠胰島β細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1277 |
商品介紹：
名稱 小鼠胰島β細(xì)胞 2.組織來源：胰腺組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 小鼠胰島β細(xì)胞分離自胰腺組織；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氫鈉、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β細(xì)胞分泌胰島素，降低血糖；γ細(xì)胞分泌生長抑素，以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌；PP細(xì)胞分泌胰多肽，抑制胃腸運(yùn)動(dòng)、胰液分泌和膽囊收縮。胰島β細(xì)胞，即胰島B細(xì)胞，是胰島細(xì)胞的一種，屬內(nèi)分泌細(xì)胞的一種，能分泌胰島素，與胰島α細(xì)胞分泌的胰高血糖素一起起到調(diào)節(jié)血糖的作用。胰島B細(xì)胞功能受損、胰島素分泌絕對或相對不足（胰島素抵抗），會使血糖升高，從而引發(fā)糖尿病。而胰島B細(xì)胞癌變會生成胰島素瘤，引起惡性血糖降低癥狀。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胰島β細(xì)胞采用先用膠原酶消化分離得到胰島、再用胰酶逐級消化胰島制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胰島β細(xì)胞經(jīng)Insulin含量檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-M200 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 AARS / alanyl-tRNA synthetase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 VEGF164 / VEGFA 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SerpinB4 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 PRL / Prolactin 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
PARP-3 / PARP3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 KYNU / Kynureninase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TH / Tyrosine Hydroxylase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
TERF1 / TRF1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 THOP1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SLPI 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠胰島β細(xì)胞無水鈉 CP,98%鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/mlAnti-arfaptin 2(phospho S260) /FITC 熒光素標(biāo)記化ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白2抗體IgG
無水鈉 SP鋯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlAnti-ARHI/FITC 熒光素標(biāo)記ARHI蛋白抗體IgG
標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.2500mol/L(0.5N)烯 CP,98.0%（劇品）Anti-ARIP2a/FITC 熒光素標(biāo)記激活素受體2A/激活素受體相互作用蛋白2a抗體IgG
無水鈉 99.99% metals basis烯 AR,99.0% （劇品）Anti-ARIP2B/FITC 熒光素標(biāo)記激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體IgG
標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.05000mol/L(0.1N)烯 分析標(biāo)準(zhǔn)品（劇品）Anti-Aromatase P450/FITC 熒光素標(biāo)記芳香化蛋白抗體IgG
無水鈉 ACS, ≥99.0%莰烯 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-Aromatase P450/FITC 熒光素標(biāo)記芳香化/色素P450/P450抗體IgG
無水鈉 農(nóng)殘級莰烯 75%Anti-ART/FITC 熒光素標(biāo)記膠質(zhì)系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子GDNF的一種抗體IgG
無水鈉 for HPLC，≥99.0% (T)莰烯 95%Anti-ASCL1/MASH1 /FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)母特異性轉(zhuǎn)移因子抗體IgG
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