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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| NCI-H1437 (肺癌細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0617 |
商品介紹：
名稱 NCI-H1437 (肺癌細(xì)胞) 別稱H1437; H-1437; NCIH1437 種屬人類 年齡（性別）男性，60歲 組織來源肺腺癌，非小細(xì)胞肺癌；轉(zhuǎn)移部位：胸腔積液 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述The cell line was established in June 1986 from pleural effusion metastasis of lung. 生物安全等級(jí)1 生長培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1%P/S 推薦傳代比例1:3-1:6 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時(shí)間~44小時(shí) (PubMed=25984343) 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PPM1B 基因全長ORF克隆
SEMA4G 基因全長ORF克隆
CD47 基因全長ORF克隆
WT1 基因全長ORF克隆
F12 基因全長ORF克隆
CRX 基因全長ORF克隆
CASP6 基因全長ORF克隆
CD82 基因全長ORF克隆
TAZ 基因全長ORF克隆
KLK2 基因全長ORF克隆
NCI-H1437 (肺癌細(xì)胞) 0.312-20 ng/mL 人沉默調(diào)節(jié)蛋白2(SIRT2)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人毛球族同族體3(TRB-3)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 馬流感病毒H3N8型(EIV-H3N8)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)
78-5000 pg/mL 人腎臟腦蛋白(KIBRA)ELISA試劑盒
0.78-50 ng/mL 人7,8-二氫-8氧橋三(8ODP/NUDT1)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL 人跨膜蛋白158(TMEM158)ELISA試劑盒
1.56-100 ng/mL 人乙型肝炎病毒X互作蛋白(HBV X-interacting protein)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Zinc-alpha-2-glycoprotein
7.8-500 ng/mL ELISA Kit for Human E3 ubiquitin-protein ligase CBL-B
0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Toll-like receptor 5
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