實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 AsPC-1 (轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞) 別稱AsPc-1; Aspc-1; ASPC-1; As-PC1; ASPC1; AsPC1; Aspc1; AsPc1 種屬人類 年齡(性別)62歲 組織來源胰腺;轉(zhuǎn)移灶;腹水腺癌 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣 背景描述AsPC-1細(xì)胞來源于人胰腺癌病人腹水中的細(xì)胞裸鼠異種移植而產(chǎn)生的癌性腹水細(xì)胞;AsPC-1細(xì)胞可以表達(dá)CEA、人胰腺相關(guān)抗原、人胰腺特異性抗原和黏蛋白。 生物安全等級(jí)1 生長培養(yǎng)基RPMI-1640+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時(shí)間~38-48小時(shí) 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ 基因表達(dá)情況carcinoembryonic antigen (CEA); human pancreas associated antigen; human pancreas specific antigen; mucin |
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
α干擾素(IFN-α)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
大皰性類天皰瘡抗體(BP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
豚鼠內(nèi)皮素1(ET-1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
豬基質(zhì)金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
分泌性白細(xì)胞蛋白抑制因子(SLPI)免疫試劑盒*直銷
大鼠酪蛋白激JAK3(Jak3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
綿羊孕激素/孕酮(PROG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
犬結(jié)締組織生長因子(CTGF)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
胃泌素(Gastrin)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
AsPC-1 (轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞) 放線菌培養(yǎng)基(改良高氏1號(hào)) Actinomycetes culture medium 250g
1瓶 NG108-12 [108CC15]細(xì)胞株 NG108-12 [108CC15] 低溫運(yùn)輸和保存
大豆胰酪蛋白胨肉湯(含亞硫酸鐵) Trypticase Soy Broth with Ferrous Sulfate 250g
100 mg DiIC12(3) 高氯酸化物 Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
250mL Borate Buffer(硼酸鹽緩沖液),0.5M,pH8.5 Borate Buffer,0.5M,pH8.5 常溫保存
5次 海量PCR片段純化試劑盒 Mega PCR Clean-Up Kit 4℃保存
2 ug pGL4.75[hRluc/CMV] pGL4.75[hRluc/CMV] 低溫運(yùn)輸,-20℃保存