實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 HUV-EC-C [HUVEC] (臍靜脈血管內(nèi)皮細胞) 別稱HUV-EC-C; HUVEC 組織來源臍靜脈/血管內(nèi)皮 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述HUV-EC-C [HUVEC]細胞可用于血管內(nèi)皮修復(fù)損傷的研究。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基Ham's F-12K+0.1mg/ml Heparin+0.03-0.05mg/ml ECGs+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~23.5 hours 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ 致瘤性No, the cells were not tumorigenic in immunosuppressed mice. Yes, the cells did form colonies in semisolid medium. 基因表達情況factor VIII |
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
猴載脂蛋白A1(Apo-A1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
小鼠單核細胞趨化蛋白5(MCP-5)免疫試劑盒進口、組裝
核糖核酸抑止劑(RNH1/PRI/RNH)免疫試劑盒進口、分裝
犬不對稱二甲基精(ADMA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
兔p53(p53)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
兔子S100B蛋白(S-100B)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
Human cleaved microtubule-associated protein tau(C-MAPT/C-TAU)免疫試劑盒進口、組裝
大鼠高敏三碘甲狀腺原(u-T3)免疫試劑盒進口、分裝
大鼠腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
核心結(jié)合因子α1,CBFA1/RUNX2 免疫試劑盒進口、組裝
HUV-EC-C [HUVEC] (臍靜脈血管內(nèi)皮細胞) 2 ug pSC194 pSC194 低溫運輸,-20℃保存
50次 柱式植物RNAout Column Plant RNAOUT 4℃保存
2 ug pCEP4-CAT pCEP4-CAT 低溫運輸,-20℃保存
酪蛋白葡萄糖瓊脂 Sabouraud Dextrose Agar 250g
1g 對苯 -β-D- 吡喃半乳糖苷 p-Nitrophenyl-β-D-Galacto-Pyranoside(PNPG) -20℃保存
50T 病毒H5N1亞型PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
1瓶 RPMI8826細胞株 RPMI8826 低溫運輸和保存