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詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| KHM-5M (甲狀腺癌細(xì)胞 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0609 |
商品介紹：
名稱 KHM-5M (甲狀腺癌細(xì)胞 別稱KHM/5M; KHM5M 種屬人類 年齡（性別）男性，65歲 組織來源甲狀腺未分化(間變性)癌；轉(zhuǎn)移部位:胸腔積液 生長(zhǎng)特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)成纖維細(xì)胞樣 生物安全等級(jí)1 生長(zhǎng)培養(yǎng)基RPMI-1640＋10% FBS＋1%P/S 推薦傳代比例1:3-1:6 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時(shí)間~27小時(shí)(JCRB) 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
DNASE1L1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HSD17B11 基因全長(zhǎng)ORF克隆
MR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
LAIR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
ERP27 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HLA-DRB5 基因全長(zhǎng)ORF克隆
HLA-DMB 基因全長(zhǎng)ORF克隆
GLIPR1L1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
FAM3A 基因全長(zhǎng)ORF克隆
FKBP7 基因全長(zhǎng)ORF克隆
KHM-5M (甲狀腺癌細(xì)胞37.5-2400 pg/mL 人胞漿非特異性二肽(Cytosolic non-specific dipeptidase) ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 新城疫病毒(NDV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)
B5培養(yǎng)基（不含瓊脂） 英文名稱：B5 Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
15.6-1000 pg/mL 人軸抑制蛋白2(Axin-2)ELISA試劑盒
1.25-80 ng/mL ELISA Kit for Human Putative T-complex protein 1 subunit theta-like 1
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Next to BRCA1 gene 1 protein
0.156-10 ng/mL 人卷曲蛋白3(Fz-3)ELISA試劑盒
Fraser培養(yǎng)基顆粒 英文名稱：Fraser Medium 產(chǎn)品規(guī)格：300ml/袋*10
0.312-20 ng/mL. 人前列腺蛋白(Prostasin)ELISA試劑盒
31.2-2000 pg/mL 人載脂蛋白L1(Apolipoprotein L1)ELISA試劑盒
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