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產(chǎn)品名稱(chēng) | 非RNA 級(jí) PVP K30( 聚乙烯基吡咯烷酮 K30) 100g圖片 |
規(guī)格 | 100mL |
價(jià)格 | 電詢(xún) |
公司非RNA 級(jí) PVP K30( 聚乙烯基吡咯烷酮 K30) 100g圖片的RNA/DNA提取目錄有下面10個(gè)系列,5000余種產(chǎn)品:點(diǎn)擊了解更RNA純化。
1、RNA純化系列產(chǎn)品
2、DNA純化系列產(chǎn)品
3、電泳及回收系列產(chǎn)品
4、探針標(biāo)記及檢測(cè)系列產(chǎn)品
5、核酸擴(kuò)增系列產(chǎn)品
6、克隆表達(dá)系列產(chǎn)品
7、基因組研究系列產(chǎn)品
8、蛋白質(zhì)研究系列產(chǎn)品
9、細(xì)胞生物學(xué)研究系列產(chǎn)品
10、即用型溶液、質(zhì)粒庫(kù)、菌種庫(kù)等等
非RNA 級(jí) PVP K30( 聚乙烯基吡咯烷酮 K30) 100g圖片的詳細(xì)介紹:
非RNA 級(jí) PVP K30( 聚乙烯基吡咯烷酮 K30) 100g圖片DNA提取流程圖:
問(wèn):常用的DNA 濃度及純度檢測(cè)方法有哪些?
稱(chēng)答非RNA 級(jí) PVP K30( 聚乙烯基吡咯烷酮 K30) 100g圖片回收得到的DNA 可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過(guò)對(duì)比定量的Marker 來(lái)定量濃度;紫外分光檢測(cè)OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說(shuō)明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時(shí)不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H 值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但不表示純度低。
問(wèn):長(zhǎng)段回收時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題?
答:當(dāng)DNA段長(zhǎng)度較長(zhǎng)(5 kb 以上)時(shí),回收效率會(huì)有所下降,這是DNA 切膠回收時(shí)的常見(jiàn)現(xiàn)象。此時(shí)建議按以下方法解決問(wèn)題:
1 適當(dāng)增加待回收DNA 樣品的點(diǎn)樣量;
2 由于長(zhǎng)段DNA 不易從樹(shù)脂上洗脫下來(lái),建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過(guò)程中對(duì)長(zhǎng)段DNA 的物理?yè)p傷,如混合振蕩操作不要過(guò)于劇烈,切膠時(shí)不要將DNA 長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外等下。
非注意事項(xiàng):
●溶液PE *次使用前請(qǐng)按瓶上標(biāo)簽加入4 倍體積的無(wú)水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無(wú)水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無(wú)水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產(chǎn)品對(duì)電泳使用的Agarose 種類(lèi)沒(méi)有嚴(yán)格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質(zhì)量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒(méi)有必要一定要使用低熔點(diǎn)的Agarose 等。
● 電泳時(shí)請(qǐng)使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)電泳時(shí)間,在條帶分離清晰后進(jìn)行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時(shí)應(yīng)盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強(qiáng)。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會(huì)偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA 段可直接用于各種酶促反應(yīng)等,不會(huì)影響后續(xù)試驗(yàn)。
● 為了保證回收效率,請(qǐng)不要使用未調(diào)整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請(qǐng)嚴(yán)格按照操作步驟操作。葉酸 59-30-3
2-羥基喹啉 59-31-4
(S)-2-甲基吡咯烷 59335-84-1
鹽酸 593-51-5
吡咯烷-3-甲酸 59378-87-9
1-Boc-3-吡咯烷甲醛 59379-02-1
593-81-7
2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯 59382-59-1
*基膦 594-09-2
3-氯-2-硝基苯胺 59483-54-4
DL-蛋氨酸 59-51-8
1-甲基吡唑-4-甲酸 5952-92-1
二甲基丙二酸 595-46-0
4-溴-2-甲氧基苯胺 59557-91-4
3-氨基-2-萘甲酸 5959-52-4
2,2-二甲基-3-羥基丙醛 597-31-9
2,2-二甲基丁二酸 597-43-3 C2orf60 2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框60抗體
phospho-CDK7 磷酸化周期素依賴(lài)性激酶7抗體
Phospho-CDK9 磷酸化周期素依賴(lài)性激酶9抗體
phospho-CHEK1 磷酸化細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶1抗體
phospho-CHEK1 磷酸化細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶1抗體
phospho-CDKN2A 磷酸化抑癌基因p16抗體
phospho-CDKN2A 磷酸化抑癌基因p16抗體
phospho-CDKN2A 磷酸化抑癌基因p16抗體
phospho-CREB-1 磷酸化CREB-1抗體
phospho-CSF2RB 磷酸化粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體β抗體
phospho-CDH2 磷酸化N-鈣粘附分子抗體
phospho-CDC27 磷酸化后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體
phospho-c-Abl 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體
phospho-c-Abl 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體
C9orf75 9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框75抗體
CD4 CD4抗體
CD42b 血小板糖蛋白GPIb抗體
CARM1 蛋白精氨酸N甲基4抗體
phospho-CARM1 磷酸化蛋白精氨酸N甲基4抗體
phospho-CDK6 磷酸化周期素依賴(lài)性激酶6抗體
非RNA 級(jí) PVP K30( 聚乙烯基吡咯烷酮 K30) 100g圖片phospho-CBL2 磷酸化原癌基因CBL2抗體
2-甲酸乙酯苯磺酰胺 59777-72-9
2,5-二氯煙酸 59782-85-3
操作步驟:
1 非RNA 級(jí) PVP K30( 聚乙烯基吡咯烷酮 K30) 100g圖片切取含有目的DNA段的瓊脂糖凝膠條帶。
● 盡量切除不含有目的DNA 部分的凝膠,減少凝膠體積,提高DNA 回收率。
● 切膠時(shí),請(qǐng)使用長(zhǎng)波長(zhǎng)UV (360 nm )光盒。且不要將DNA 長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外燈下,以防DNA 損傷。
2 稱(chēng)取凝膠的重量近似地確定其體積。
● 凝膠重量的稱(chēng)量方法:取1.5 ml 離心管電子天平稱(chēng)初質(zhì)量,切膠裝在離心管后稱(chēng)終質(zhì)量,兩者差即為膠的質(zhì)量。不同離心管的重量可能有差異,因此,每個(gè)離心管的重量需單獨(dú)稱(chēng)量。
3 按照每100 mg 瓊脂糖凝膠對(duì)應(yīng)100 µl 溶液BD 的比例,向離心管中加入溶液BD。
4 50 ℃水浴7-10min,直至凝膠*溶化。期間需要振蕩混合3 次。
● 瓊脂糖必須*融化,以免堵塞柱子,嚴(yán)重影響DN段的回收效率。
● 如果總體積大于500 µl,可適當(dāng)增加溶膠時(shí)間。
● 若此時(shí)溶液變紅,可加10 µl 3M NaAC (pH 5.2)。
5 將步驟4 所獲溶液置于DNA 純化柱中,靜置2min 。
● 膠塊*溶解后將膠溶液溫度降至室溫再上柱,因?yàn)榧兓谳^高溫度時(shí)結(jié)合DNA 的能力較弱。
6 12,000 rpm 離心1min。若溶液量大于DNA 純化柱的容積,可分兩次離心,棄濾液。
● 此時(shí)DNA 片段被吸附于DNA 純化柱中的硅膠膜上。
7 加入500 µl 溶液BD。12,000 rpm, 離心1min,棄濾液
8 加入500 µl 溶液PE。12,000 rpm, 離心1min,棄濾液。
● 溶液PE 初次使用前用無(wú)水乙醇按1: 4 稀釋?zhuān)春?0% 乙醇。
● 此步驟的作用是將硅膠膜上吸附的蛋白、鹽等雜質(zhì)洗脫,以獲得高質(zhì)量DNA 片段。
9 加入500 µl 溶液PE。12,000 rpm, 離心1min,棄濾液。
10 12,000 rpm 離心 3min ,以*去除純化柱中的液體。
● 此步驟的作用是去除殘留乙醇,避免殘留乙醇影響后續(xù)酶促反應(yīng)。同時(shí)也利于DNA 片段的充分溶解。
11 將離心柱置于新的1.5 ml 離心管中。向純化柱的中央處,懸空滴加30-100 µl 溶液Eluent (60℃預(yù)熱),靜置2min 。12,000 rpm 離心1min,管底即為目的DNA 片段。貯存于-20℃。
● 溶液Eluent 可用無(wú)菌雙蒸水代替,但其pH 需為8.0-8.5,加入體積視DNA 目的片段的多少、用戶(hù)對(duì)目的片段濃度要求而定。
● 對(duì)溶液Eluent 60℃預(yù)熱,會(huì)提高提取DNA 目的片段的產(chǎn)量。
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