詳細介紹
反應(yīng)五要素:
西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm(或面積相當?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測試劑盒方法 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
?
自備物品:
西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
1,5-萘二磺鈉英文名稱:1,5- naphthalene two sulfonic acidCAS號:1655-29-4分子式:332.25334分子量: C10H6Na2O6S2
聚(甲)硅烷支撐鈀/氧鋁混合催劑分子式:分子量:英文名稱:Poly (Jia Benji) silane supported palladium / alumina catalystCAS號:#$!!#
三氯三乙絡(luò)鋁分子式:247.51分子量: C6H15Al2Cl3英文名稱:Three chlorine three ethylCAS號:12075-68-2
間二(三氟甲)分子式:214.11分子量: C8H4F6英文名稱:Between two (three f) benzeneCAS號:402-31-3
對溴甲分子式:171.04分子量: C7H7Br英文名稱:To bromine tolueneCAS號:106-38-7
西瑞香素英文名稱:DaphnoretinCAS號:2034-69-7分子式:352.3分子量:C19H12O7
二磷酸鉀分子式:224.28分子量: C12H10KP英文名稱:Two phenyl potassium phosphateCAS號:15475-27-1
性蘭英文名稱:Acid blueCAS號:2379-74-0分子式:393.31分子量: C18H10Cl2O2S2
2,6-二氯-3-羥-4-吡甲醛分子式:192分子量: C6H3Cl2NO2英文名稱:2,6- two -3- hydroxy -4- pyridine formaldehydeCAS號:185423-26-1
N-CBZ-4-乙酸-分子式:277.32分子量: C15H19NO4英文名稱:N-CBZ-4- - piperidine acetateCAS號:63845-28-3
2-芐鹽酸鹽分子式:211.73分子量: C12H18ClN英文名稱:2- benzyl piperidine hydrochlorideCAS號:
西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測試劑盒方法Rabbit Anti-mouse IgG 兔抗小鼠IgG 1mg
SRC src原癌基因抗體 0.2ml
PACAP-38 腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38抗體 0.1ml
Smad3 細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體 0.1ml
phospho-JunB(Ser79) 磷酸化活化蛋白激酶B抗體 0.1ml
MICS1 生長激素誘導(dǎo)跨膜蛋白抗體(真皮乳頭源性蛋白2) 0.2ml
BCL2L12 BCL2樣12含脯氨酸蛋白抗體 0.2ml
SV2A 突觸泡蛋白2A抗體 0.2ml
C1ORF74 1號染色體開放閱讀框74抗體 0.2ml
S100A11 S100鈣結(jié)合蛋白A11抗體 0.1ml
ZNF217 鋅指脂蛋白217抗體 0.2ml
LASS1 長壽相關(guān)基因lASS1抗體 0.2ml