詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
乙型流感病毒(IBV)核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
乙型流感病毒(IBV)核酸檢測試劑盒方法 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
?
自備物品:
乙型流感病毒(IBV)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
性NT英文名稱:Acid black NTCAS號:分子式:分子量:
殘殺威英文名稱:SlaughterCAS號:114-26-1分子式:209.24分子量: C11H15NO3
3-氯-2-氟吡分子式:131.53分子量: C5H3ClFN英文名稱:3- chloride -2-CAS號:1480-64-4
3-溴吡-N-氧物分子式:174分子量: C5H4BrNO英文名稱:3- -N- oxideCAS號:2402-97-3
2-溴-3-氟三氟甲分子式:243分子量: C7H3BrF4英文名稱:2- -3- three fCAS號:104540-42-3
L-谷氨對硝酰胺英文名稱:L- glutamic acidCAS號:24032-35-7分子式:267.24分子量: C14H20N4O2
2,5-雙(溴甲)-1,4-雙(辛氧)分子式:520.386分子量: C24H40Br2O2英文名稱:2,5- bis (Xiu Jiaji) -1,4- bis (Xin Yangji) benzeneCAS號:147274-72-4
槐果堿英文名稱:SophocarpineCAS號:145572-44-7分子式:246.35分子量:C15H22N2O
3-溴-1-丙英文名稱:3- -1-CAS號:627-18-9分子式:138.99分子量: C3H7BrO
5-氯-3-并-2,1-異噁唑分子式:229.66分子量: C13H8ClNO英文名稱:5- -3- and -2,1- chloride phenyl isoxazoleCAS號:719-64-2
雙(三氟-2,4-戊二酮)錳分子式:361.1分子量: C10H8F6MnO4英文名稱:Double (three fluoro -2,4- base manganese pentanedione)CAS號:20080-72-2
乙型流感病毒(IBV)核酸檢測試劑盒方法PPM1B 蛋白質(zhì)磷酸酶1B抗體(PP2Cβ) 0.2ml
CCL21/6Ckine 淋巴細(xì)胞趨化因子CCL21抗體 0.1ml
FMRP/FMR1 脆性X智力低下蛋白抗體 0.2ml
phospho-ATF2(Ser322) 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 0.1ml
GLP-1(1G9) GLP-1單克隆抗體 0.1ml
5 MethylCytosine 5甲基胞嘧啶抗體 0.2ml
OPGL/RANKL/ODF 骨保護(hù)蛋白配體抗體(破骨細(xì)胞分化因子) 0.1ml
SUPT16H/CDC68 染色體特異性轉(zhuǎn)錄延伸因子抗體 0.2ml
CDK6 周期素依賴性激酶6抗體 0.1ml
CTRP1/G protein coupled receptor interacting protein 1 G蛋白偶聯(lián)受體相互作用蛋白1抗體(補(bǔ)體Clq TNF相關(guān)蛋白1) 0.2ml
AVEN 細(xì)胞死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制劑) 0.1ml
NOL8 核仁蛋白8抗體 0.2ml