詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
白喉?xiàng)U菌(CD)核酸檢測(cè)試劑盒圖片參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類(lèi) |
白喉?xiàng)U菌(CD)核酸檢測(cè)試劑盒圖片 | 48T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
?
自備物品:
白喉?xiàng)U菌(CD)核酸檢測(cè)試劑盒圖片15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
萘紅英文名稱:Naphthalene redCAS號(hào):131-22-6分子式:247.29分子量: C16H13N3
人參皂苷Ro英文名稱:Ginsenoside RoCAS號(hào):34367-04-9分子式:957.10564分子量:C48H76O19
4-(羥)喹啉-N-氧物分子式:176.18分子量: C9H8N2O2英文名稱:4- (hydroxy amino) -N- oxideCAS號(hào):4637-56-3
3-氯-4-溴甲分子式:分子量:英文名稱:3- -4- bromideCAS號(hào):
三氟磺酸亞銅分子式:503.33分子量: [CuOSO2CF3]2•C英文名稱:三氟磺酸亞銅CAS號(hào):37234-97-2
五氨合鐵酸鈉鹽水合物分子式:271.94分子量: C5H3FeN6Na3·xH2O英文名稱:Five - iron ammonia acid sodium salt hydrateCAS號(hào):14099-05-9
R-1-boc-2-分子式:210.27分子量: C11H18N2O2英文名稱:R-1-boc-2- cyano piperidineCAS號(hào):242459-44-5
5-三氟甲尿嘧分子式:180.08分子量: C5H3F3N2O2英文名稱:5- three fluorine uracilCAS號(hào):54-20-6
N-甲咔唑分子式:181.24分子量: C13H11N英文名稱:N- methyl carbazoleCAS號(hào):1484-12-4
鄰硝甲英文名稱:Ortho nitro tolueneCAS號(hào):88-72-2分子式:137.14分子量: C7H7NO2
2,3-雙(4-甲氧)-5-(4-)氯四氮唑分子式:419.87分子量: C22H18ClN5O2英文名稱:Double 2,3- (4- methoxyphenyl) -5- (4- - phenyl) tetrazolium chlorideCAS號(hào):zx0
白喉?xiàng)U菌(CD)核酸檢測(cè)試劑盒圖片MIDN 中腦核仁蛋白抗體 0.2ml
HHV4/CMV 人類(lèi)巨細(xì)胞病毒抗體 0.2ml
DCIR/CLEC4A C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員A抗體 0.2ml
MTMR8 肌管素相關(guān)蛋白8抗體 0.2ml
Phospho-VASP(Ser239) 磷酸化血管擴(kuò)張刺激磷蛋白抗體 0.1ml
Rabbit Anti-Biotin/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG 0.1ml
Wnt1 信號(hào)通路Wnt1抗體 0.1ml
ANGPTL6 血管生成素相關(guān)蛋白6抗體 0.2ml
LRFN3/SALM4 神經(jīng)突觸粘附樣分子4抗體 0.2ml
NEK3 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Nek3抗體 0.2ml
Rabbit Anti-human IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗人IgM 0.1ml
Goat Anti-Mouse IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.3ml