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外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本制備與分析
閱讀：784 發(fā)布時間：2017-4-181. 轉(zhuǎn)化細(xì)胞采血及接種培養(yǎng)
1.1 在酒精燈火焰上，用滅菌注射器（一次性注射器）抽取肝素0.2ml，使肝素濕潤至管壁。
1.2 常規(guī)消毒后，采集外周靜脈血5ml，轉(zhuǎn)動注射器使血液與肝素混勻。
1.3 在超凈工作臺中，預(yù)先將RPMI 1640液體培養(yǎng)基（5ml，含植物血凝素60mg/ml、10%小牛血清）加入消毒好的小培養(yǎng)瓶中，再滴加25滴全血（6號針頭），水平搖動混勻。
1.4 置37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時。培養(yǎng)過程中每天水平搖動培養(yǎng)物1～2次，使血液均勻懸浮，再繼續(xù)培養(yǎng)。
1.5 終止培養(yǎng)前2～4小時，加入秋水仙素，使終濃度達(dá)到0.2μg/ml。輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使秋水仙素混勻。繼續(xù)培養(yǎng)至72小時。
2．制片
2.1 收集轉(zhuǎn)化細(xì)胞時，去掉瓶塞，用乳頭吸管吸取培養(yǎng)液，充分混勻培養(yǎng)物，再將全部培養(yǎng)物吸入刻度離心管中。
2.2 1000 rpm離心8分鐘（注意先配平）。
2.3 棄上清液，加入37℃預(yù)溫的 0.075 mol/L KCl溶液8 ml，用吸管輕輕吹打細(xì)胞團(tuán)混勻后，置37℃恒溫水浴箱低滲處理25分鐘。
2.4 加入 1ml新配制的固定劑（甲醇：冰乙酸=3：1），用吸管小心吹打、混勻，1000rpm離心8分鐘。
2.5 棄上清液，加入8ml固定劑，吹打細(xì)胞團(tuán)制成細(xì)胞懸液后，室溫下固定20分鐘。
2.6 1000 rpm離心 8分鐘。
2.7 棄上清液，重復(fù)固定一次。
2.8 棄上清液，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量的多少適當(dāng)加入數(shù)滴新配制的固定劑，吹打細(xì)胞制成懸液。
2.9 吸取少量細(xì)胞懸液，滴2～3滴于冰水浸泡過的載玻片上，吹散，氣干。
2.10 將標(biāo)本置Giemsa染液中，染色8分鐘，水洗去浮色，氣干。
2.11 轉(zhuǎn)化細(xì)胞顯微鏡下觀察染色體標(biāo)本分裂相的多少及分散情況。