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分析人正常組織來源細胞有絲分裂的實驗辦法
閱讀:446 發(fā)布時間:2017-8-15人正常組織來源細胞是指歸于割裂期的細胞占總細胞數(shù)的百分率.用于表明細胞增殖旺盛的程度,也可用于檢查藥物對細胞增殖能力的影響。用蓋玻片培育法培育細胞,做固定和染色后,鏡下調(diào)查和計數(shù)1000個細胞中處于割裂期的細胞數(shù)并核算MI。
(一)資料
1.待檢資料(藥物)。
2.細胞培育成層的貼壁細胞。
3.試劑 甲醇、3%吉姆薩染液。
4.器材CO2培育箱、倒置顯微鏡、蓋玻片(2.2 cm×2.2 cm,需預(yù)先清潔和滅菌處理)、塑料培育皿(3.5 cm)、載玻片、封片用蓋玻片、中性樹膠。
(二)試驗辦法
1.將細胞消化成單個細胞懸液,將細胞懸液分瓶培育,分紅不加藥的對照組和加人不一樣劑量藥物的試驗組。
2.細胞傳代培育的辦法培育細胞,并制成濃度為105/ml的細胞懸液。
3.將清潔和滅菌處理的蓋玻片放置在塑料培育皿中,將細胞懸液搖勻后接種于培育皿中,各皿中接種量一樣。
4.別離于培育24 h、48ht和72h后從培育皿中取出蓋玻片,在Hanks液中漂洗2~3次。
5.先用甲醇固定30 min,再用吉姆薩染液染色。曬干后用中性樹膠封片。
6.油鏡下或高倍鏡下計數(shù)1000個細胞中處于割裂期的細胞數(shù)。
7.核算MI按下列公式核算MI。
(三)成果與分析
將對照組和藥物組的試驗成果繪制成直方圖并加以比較,也可繪制成MI曲線進行比較:
(四)注意事項
1.人正常組織來源細胞為了削減誤差,試驗者有必要了解各期割裂象細胞的形狀特征,該試驗從頭到尾由一人完結(jié),當兩人以上調(diào)查時,應(yīng)把握一樣的標準。
2.MI曲線與細胞生長曲線趨勢根本相似,但不*一樣。如果在細胞增長達飽和密壁并進入中止期后.細胞數(shù)量許多,而割裂象細胞可*消失。
3.細胞在蓋玻片上的密度常不均勻,細胞密集區(qū)與稀疏區(qū)的割裂象細胞數(shù)目也許不一樣。計數(shù)時要挑選密度近似區(qū),以削減試驗誤差。
規(guī)格: ≥98% Dihydrocapsaicin *: 二氫辣椒素
規(guī)格: ≥98% Dihidromethysticin *: 二氫麻醉椒苦素
規(guī)格: ≥98% Dihydrolycorine *: 二氫石蒜堿
規(guī)格: ≥98% Dihydromyricetin *: 二氫楊梅素
規(guī)格: ≥99% Dihydrokavain *: 二氫醉椒素
人正常組織來源細胞