技術文章
轉化細胞或組織化學染色的相關問題
閱讀:161 發(fā)布時間:2018-5-8附上我們這里轉化細胞的組化步鄹:(切片復溫涼干完畢)
1。加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液(甲醇80ml+0.01MPBS 20ml+30%過氧化氫 1ml)30min,以消除內源性過氧化物酶的影響,0.01MPBS清洗5min×3;
2。加入配好的0.3% Triton X100(30% Triton X100 1ml+0.01MPBS 100ml)30min,以增加細胞的通透性,0.01MPBS清洗5min×3;
3。加入用血清稀釋液(牛血清白蛋白1.00g+0.01MPBS 100ml+疊氮納0.08g+30% Triton X100 1ml)稀釋的*抗體4℃反應24-48h。吸去抗體,0.01MPBS洗5min×3;
4。加入血清稀釋液或0.01MPBS稀釋的二抗,室溫孵育2h。吸去二抗,0.01MPBS洗5min×3;
5。加入ABC復合物,室溫孵育2h,0.01MPBS洗5min×3,蒸餾水迅速沖三次;
6。加入硫酸鎳銨溶液(DAB 25mg+蒸餾水50ml+硫酸鎳銨醋酸緩沖液50ml+葡萄糖200mg+氯化銨40mg+葡萄糖氧化酶1mg),進行免疫細胞化學顯色,時間不超過30min。不時在顯微鏡下進行觀察,待細胞著色而背底顏色較淡時馬上吸去顯色液,蒸餾水迅速沖三次后加入0.01MPBS終止反應;
或直接加入配好的DAB溶液進行顯色。
7。梯度酒精(70%、80%、90%酒精5min×1,95%酒精5min×2,100%酒精5min×3)脫水之后,二甲苯透明,中性樹脂封片。
而對培養(yǎng)的細胞則比較簡單:(細胞種在玻片上)
1。固定液固定10-30min,0.01MPBS清洗2min×3;
2。羊血清封閉液封閉(可以加入0.3% Triton X100 )30-60min分鐘;
3。加入用血清稀釋液(牛血清白蛋白1.00g+0.01MPBS 100ml+疊氮納0.08g+30% Triton X100 1ml)稀釋的*抗體室溫反應1-2h或4℃過夜。吸去抗體,0.01MPBS洗2min×3;
4。加入血清稀釋液或0.01MPBS稀釋的二抗,室溫孵育1h。吸去二抗,0.01MPBS洗2min×3;(如果是熒光二抗就可以直接用50%甘油封片,進行觀察了)
5。加入ABC復合物,室溫孵育1h,0.01MPBS洗2min×3,蒸餾水迅速沖三次;
6。加入硫酸鎳銨溶液(DAB 25mg+蒸餾水50ml+硫酸鎳銨醋酸緩沖液50ml+葡萄糖200mg+氯化銨40mg+葡萄糖氧化酶1mg),進行轉化細胞化學顯色,時間不超過30min。不時在顯微鏡下進行觀察,待細胞著色而背底顏色較淡時馬上吸去顯色液,蒸餾水迅速沖三次后加入0.01MPBS終止反應;
或直接加入配好的DAB溶液進行顯色。
100715-200501 檢查 50mg N-甲基-3-氮苯雙環(huán)(3,3,1)壬-9α醇
100716-200501 含量測定 50mg 鹽酸苯環(huán)壬酯
100717-201002 含量測定 100mg 非洛地平
100718-200701 UV含量測定 100mg 二氟尼柳
100719-200701 含量測定 100mg 羥苯甲酯鈉
100719-200701 含量測定 100mg 布洛芬雜質C
100720-200701 檢查用 20mg 2-(4-異丁酰苯基丙酸)布洛芬雜質A)
100721-200701 檢查用 20mg 4-異丁基苯甲酸
100721-200701 檢查用 20mg 布洛芬雜質B
轉化細胞