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影響人正常組織來源細(xì)胞生長的幾點(diǎn)要素
閱讀：458 發(fā)布時間：2018-6-7人正常組織來源細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng),失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制,因此,除滿足營養(yǎng)的要求外,還必須使細(xì)胞生存環(huán)境晝接近活體的環(huán)境.外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長.
一、溫度：
一般哺乳類及禽類細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃.溫度過高或過低都會影響到細(xì)胞的生長.細(xì)胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強(qiáng),在低溫下,細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時,雖影響細(xì)胞代謝,但并無傷害作用.把細(xì)胞置于23~25℃時,細(xì)胞仍能生存和生長,但速度減緩,不過,魚類細(xì)胞的適宜培養(yǎng)溫度為23~25℃.若溫度過低,在降到冰點(diǎn)以下時,細(xì)胞因胞外水和胞質(zhì)結(jié)冰而受損死亡,但若向培養(yǎng)基中加入甘油或二甲基亞砜（DMSO）等保護(hù)劑,封入安瓿中后,置于液氮或低溫冰箱（-70℃）中,可起保護(hù)作用,此時細(xì)胞可而耐受-70℃以下溫度,能長期儲存,解凍后細(xì)胞復(fù)蘇,仍能繼續(xù)生長增殖,細(xì)胞物性狀不受任何影響.此為保存細(xì)胞的主要手段.
高溫對細(xì)胞培養(yǎng)不利.細(xì)胞在39~40℃培養(yǎng)1h,會受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù),但不能忍受溫度再升高2℃,持續(xù)數(shù)小時,即在41~42℃培養(yǎng)1h,細(xì)胞操作嚴(yán)重,溫度到43℃以上時細(xì)胞多數(shù)被殺死.高溫主要引起酶的滅活、類脂質(zhì)破壞、核分裂的破壞,產(chǎn)生凝固酶使細(xì)胞發(fā)生凝固,另外使蛋白質(zhì)變性.因此,體外培養(yǎng)細(xì)胞時一定要避免高溫.
二、滲透壓：
細(xì)胞在高滲透溶液中低滲溶液中,可以立即發(fā)生皺縮或腫脹、破裂.所以,滲透壓是體外細(xì)胞培養(yǎng)的重要條件之一.哺乳動物和其他動物組織細(xì)胞體外孫女培養(yǎng)的滲透壓的維持主要與NaCl有關(guān),但不能忽視其他電解質(zhì)與滲透壓的關(guān)系,滲透壓與單位體積溶劑內(nèi)溶質(zhì)的分子數(shù)和離子婁成正比.為此,按一定比例控制培養(yǎng)基中離子平衡,維持正常滲透壓是很重要的.這不僅是為了維持細(xì)胞張力,而且是為了調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝.因?yàn)榧?xì)胞外離子輸送和離子濃度改變著其他營養(yǎng)物質(zhì)的輸送（如氨基酸、糖等）,直接影響細(xì)胞基本合成系統(tǒng).
理想的滲透壓因細(xì)胞的類型及種族而異,人血漿滲透壓為290mmol/L,被視為是體外培養(yǎng)人類細(xì)胞的理想滲透壓.哺乳動物細(xì)胞的滲透壓一般為290~300mmol/L.人胚肺成纖維細(xì)胞為250~325mmol/L,鼠細(xì)胞則為310mmol/L左右.在實(shí)際應(yīng)用中,260~320mmol/L的滲透壓可適于大多數(shù)細(xì)胞.常用培養(yǎng)基的滲透壓值見表2-3.
三、氣體環(huán)境和PH值：
體外培植細(xì)胞需要理想的氣體環(huán)境,氧和二氧化碳石細(xì)胞生存必需的條件之一.
1、氧：
氧參加細(xì)胞的三羧酸循環(huán),產(chǎn)生能量以供應(yīng)給細(xì)胞生長、增殖和合成各種所需成分.有些細(xì)胞在低氧條件下,可借糖酵解取得能量,單多數(shù)細(xì)胞低氧時不能生存.氧張力通常維持在略低于大氣狀態(tài),若氧分壓超過大氣中氧的含量可能對有些細(xì)胞有害.
2、二氧化碳：
采用開放式培養(yǎng)時（碟或培養(yǎng)瓶松蓋培養(yǎng)或培養(yǎng)板培養(yǎng)）,一般要把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳的混合氣體環(huán)境中.CO2既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,又是細(xì)胞生長所必需的成分,并與維持培養(yǎng)基的pH值有關(guān).在密閉瓶中CO2濃度偏低的情況下,細(xì)胞容易生長,一般不能低于1%,否則有損細(xì)胞.CO2增加將使pH值下降.
3、pH值：
大多數(shù)細(xì)胞適于在pH7.2~7.4條件下生長,低于pH6.8或高于pH7.6對細(xì)胞有害,甚至退變或死亡各種細(xì)胞對pH值的要求不盡相同.一般原代培養(yǎng)細(xì)胞對pH值的堿性的耐受比對酸性的耐受差,偏酸的環(huán)境比偏堿的環(huán)境對人正常組織來源細(xì)胞生長有利.為了維持培養(yǎng)環(huán)境恒定的pH值,多采用在培養(yǎng)基中加入磷酸鹽等緩沖劑的方法.磷酸緩沖劑中的NaHCO3可供給CO2,但CO2易于逸出,故只適用于封閉式培養(yǎng).若開放式培養(yǎng)還是置于含有5%CO2的氣體環(huán)境中為宜.為克服NaHCO3調(diào)整的麻煩,也可用羧基哌唪硫磺酸,它對細(xì)胞無毒性,主要作用是防止pH值迅速變動,在開瓶通氣培養(yǎng)或活細(xì)胞觀察時能維持較恒定的pH值.
5 x 10^5 cells/vial 人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞 HCAEC
5 x 10^5 cells/vial 人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞 HAEC
5 x 10^5 cells/vial 人主動脈平滑肌細(xì)胞 HASMC
5 x 10^5 cells/vial 人主動脈成纖維細(xì)胞 HAF
5 x 10^5 cells/vial 人心肌細(xì)胞 HCM
5 x 10^5 cells/vial 人心肌細(xì)胞-成人 HCM-a
5 x 10^5 cells/vial 人心臟成纖維細(xì)胞 HCF
5 x 10^5 cells/vial 人心臟成纖維細(xì)胞-成人心室 HCF-av
5 x 10^5 cells/vial 人心臟成纖維細(xì)胞-成人心房 HCF-aa
5 x 10^5 cells/vial 人角膜上皮細(xì)胞 HCEpiC
5 x 10^5 cells/vial 人角膜細(xì)胞 HK
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