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細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)
閱讀:2383 發(fā)布時(shí)間:2017-3-27轉(zhuǎn)化細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)
1. 您收到細(xì)胞時(shí),若干冰已經(jīng)*融化,請(qǐng)立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng),切勿再次低溫凍存;若尚留有干冰,請(qǐng)立即將含有細(xì)胞的凍存管放入液氮中保存待用,并按條件貯存細(xì)胞,切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。
2. 請(qǐng)您在接收細(xì)胞后的4周內(nèi)及時(shí)做復(fù)蘇培養(yǎng),以確認(rèn)細(xì)胞活力、狀態(tài)并保種。逾期恕不受理售后問(wèn)題,謝謝合作!
3. BNCC凍存細(xì)胞采用優(yōu)化配比的細(xì)胞凍存液,無(wú)需離心,細(xì)胞解凍后直接將250 ul細(xì)胞懸液滴入裝有8-10 ml*培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。
貼壁細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請(qǐng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作)
1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次,加2~3 ml 含0.25% EDTA的胰酶進(jìn)行消化(注意把握消化時(shí)間,通??刂圃?~2min);
2. 鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小時(shí)去掉胰酶,加6~8 ml *培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,盡量把細(xì)胞層吹落、吹散;
3. 取出部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4. 注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液,待轉(zhuǎn)化細(xì)胞密度達(dá)到70-80%以后重復(fù)傳代操作或者凍存。
懸浮細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程(請(qǐng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作)
1. 懸浮細(xì)胞常規(guī)傳代操作為半量換液,分瓶傳代,即取出一半細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中,添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);也可根據(jù)細(xì)胞密度分多瓶傳代。
2. 注意培養(yǎng)基PH值變化情況,定期換液,待細(xì)胞密度達(dá)到70-80%時(shí)重復(fù)傳代操作或者凍存。
半貼壁半懸浮細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)(請(qǐng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作)
1. 若懸浮細(xì)胞較多且折光率良好,可離心收集,繼續(xù)培養(yǎng)。
2. 若有少量細(xì)胞懸浮,也可不用收集,傳代操作按常規(guī)貼壁細(xì)胞操作流程處理。
3. 若懸浮細(xì)胞較多,離心收集,原瓶中貼壁細(xì)胞按照常規(guī)規(guī)貼壁細(xì)胞操作流程進(jìn)行消化、終止消化、吹打,并與之前收集的懸浮細(xì)胞混懸,分瓶培養(yǎng)。
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