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          轉(zhuǎn)化細胞的大規(guī)模培養(yǎng)三種方式

          閱讀:134          發(fā)布時間:2017-9-29

          轉(zhuǎn)化細胞是腺病毒載體的包裝細胞。腺病毒是繼逆轉(zhuǎn)錄病毒后用于基因治療研究的熱門載體。直接將腺病毒載體導(dǎo)入人體內(nèi)表達目的基因,治療惡性腫瘤、心血管疾病或一些遺傳疾病已取得可喜進展;利用腺病毒載體在包裝細胞293中表達分泌性蛋白質(zhì),如蛋白酪氨酸激酶1C等亦成為重組蛋白的一條途徑。因此完善293細胞的大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)具有越來越重要的市場意義。哺乳細胞的大規(guī)模培養(yǎng)方式有三種:貼壁培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、無血清懸浮培養(yǎng)。這三種方式均可用于293細胞的大規(guī)模培養(yǎng)。

          細胞特性

          細胞是用5型腺病毒75株系轉(zhuǎn)化,含有Ad5 E1區(qū)的人胚腎細胞。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham與J.S.Miley于1976年用DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建而成。293細胞是貼壁依賴型成上皮樣細胞,表現(xiàn)出典型的腺病毒轉(zhuǎn)化細胞的表型,細胞允許Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。293細胞為人亞三倍體細胞系。293細胞在無Ca2+或含Ca2+培養(yǎng)基中可同樣生長,也可生長在血清濃度降低的培養(yǎng)基中。

          轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)

          轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)一般用于小量培養(yǎng)到大規(guī)模培養(yǎng)的過渡階段,或作為生物反應(yīng)器接種細胞準(zhǔn)備的一條途徑。與傳統(tǒng)靜止單層培養(yǎng)相比,轉(zhuǎn)瓶具有三大優(yōu)點:為細胞提供較大的生長表面;輕微的轉(zhuǎn)動可以防止培養(yǎng)液中形成的某些成分對細胞生長可能產(chǎn)生的影響;細胞大部分時間僅覆蓋一薄層培養(yǎng)液,有利于氣體交換。我們已成功實現(xiàn)293細胞的轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。由于293細胞對生長環(huán)境的改變較為敏感,細胞容易成團,因此維持穩(wěn)定的溫度、酸堿度和轉(zhuǎn)動速度對細胞正常均勻生長至關(guān)重要。

          現(xiàn)在使用的轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)系統(tǒng)包括二氧化碳培養(yǎng)箱和轉(zhuǎn)瓶機兩部分。293細胞接種后,維持適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速培養(yǎng)。不同的細胞轉(zhuǎn)速略有不同。細胞的均勻分散貼壁情況與培養(yǎng)液溫度、瓶子的轉(zhuǎn)動速度和細胞特性有關(guān)。在5-6天的培養(yǎng)周期中,細胞量可增殖20倍。

          反應(yīng)器貼壁培養(yǎng)

          此種培養(yǎng)方式中,轉(zhuǎn)化細胞貼附于固定的表面生長,不因為攪拌而跟隨培養(yǎng)液一起流動,因此比較容易更換培養(yǎng)液,不需要特殊的分離細胞和培養(yǎng)液的設(shè)備,可以采用灌流培養(yǎng)獲得高細胞密度,能有效地獲得一種產(chǎn)品;但擴大規(guī)模較難,不能直接監(jiān)控細胞的生長情況,故多用于制備用量較小、價值高的生物藥品。
          進口/國產(chǎn)    RT    維生素C測試盒    1000支/包
          *        5’-核苷酸酶測試盒    1000支/包
          *    RT    D-木糖測試盒    1000支/包
          *    RT    糖化血紅蛋白測試盒    1000支/包
          進口/國產(chǎn)        糖化血清蛋白測試盒(果糖胺法,帶標(biāo)準(zhǔn))    1000支/包
          *    RT    肝/肌糖元測試盒    1000支/包
          *    RT    脂蛋白(a)測試盒    1000支/包
          *        脂肪酶測試盒    500支/包
          進口/國產(chǎn)    RT    總脂酶測試盒【脂蛋白脂酶(LPL)    1000支/包
          轉(zhuǎn)化細胞

           

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