商品介紹:
Tideglusib是一種不可逆的GSK-3抑制劑,作用于GSK-3βWT和GSK-3βC199A,IC50分別為5nM和60nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):865854-05-3 別名:NP-12;NP031112 純度:99.81% 分子式:C??H??N?O?S 分子量:334.39 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
草花忍冬葉點(diǎn)霉擬南芥MAP65蛋白抗體Human NEK3 ELISA Kit羥基賴正己(HLNL)ELISA Kit
菌鏈霉菌神經(jīng)干RNA結(jié)合蛋白Musashi1抗體Human NDUFB8 ELISA Kit羥基膠原吡啶交聯(lián)(OH-PYD)ELISA Kit
大腸埃希氏菌粘膜粘附分子1抗體Human NDUFB9 ELISA Kit強(qiáng)啡肽(Dyn)ELISA Kit
釀酒酵母髓過氧化物抗體Human NDUFC2 ELISA Kit潛伏轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白2(LTBP2)ELISA Kit
土曲霉膜相關(guān)鳥苷反轉(zhuǎn)激1抗體Human NDUFS1 ELISA Kit潛伏膜蛋白1(LMP-1)ELISA Kit
長枝木霉神經(jīng)突觸前膜胞內(nèi)蛋白13抗體Human NDUFS5 ELISA Kit前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA Kit
凍土毛霉高度保守基因相關(guān)蛋白Membralin抗體Human NDUFS3 ELISA Kit前鐵調(diào)(Pro-Hepc)ELISA Kit
釀酒酵母運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元及胰腺同源蛋白1抗體Human NDUFS6 ELISA Kit前列腺特異性抗原(PSA)ELISA Kit
副豬嗜血桿菌少突膠質(zhì)髓鞘相關(guān)蛋白抗體Human NDUFV1 ELISA Kit前列腺性磷(PAP)ELISA Kit
強(qiáng)壯類芽孢桿菌CDC42結(jié)合蛋白激α抗體(MRCKα)Human NDUFV2 ELISA Kit前列腺H2(PGH2)ELISA Kit
費(fèi)希爾曲霉髓樣分化蛋白抗體Human SERPINF1(Pigment epithelium-derived factor) ELISA Kit前列腺F2α(PGF2α)ELISA Kit
釀酒酵母外周髓磷脂P0蛋白/P0蛋白抗體Human NDUFV3 ELISA Kit前列腺F(PGF)ELISA Kit
栗疫菌褪黑受體1A/松果體受體1A抗體Human NDRG2(N-myc downstream-regulated gene 2 protein) ELISA Kit前列腺E2(PGE2)ELISA Kit
米曲霉肌生成抗體Human NDUFB5 ELISA Kit前列腺E1(PGE1)ELISA Kit
J53大腸磷化髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1抗體Human NDUFA4L2 ELISA Kit前列腺D合成(PTGDS)ELISA Kit
多孢霉DNA損傷關(guān)鍵蛋白Mre11抗體Human NDUFA3 ELISA Kit前列腺D合成(PGDS)ELISA Kit
: =NBRC15892=ATCC23272=CCUG33624=CIP101887=DSM0016=IFO15892=JCM1112=LMG9213=LMG13557=NRRLB-14171資源名稱: 羅伊氏乳桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR紫草
馬流感病毒Influenzavirus A│Equine influenza virus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,分子生物學(xué)級(jí)番瀉苷D
: DSM44737資源名稱: 擬諾卡氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,sigma分裝番瀉苷C
GSK-3抑制劑(Tideglusib)DTNBP1 精神分裂癥易感因抗體正己 >99.8%(GC)
DRP3 Dystrobrevin α蛋白抗體正己 99%
DTNB 肌Dystrobrevin β蛋白抗體正庚 Standard for GC
dUTPase 脫氧尿嘧啶三核苷水解抗體正庚 AR,98.0%
DVH(Duck viral hepatitis) 鴨病性肝炎抗體正庚 分析標(biāo)準(zhǔn)品
DPV(Duck plague virus) 鴨瘟病DPV抗體正己 Standard for GC, ≥99.5% (GC)
DP-I 橋粒斑蛋白1抗體正己 CP,98.0%
DP-II 橋粒斑蛋白2抗體正己 分析標(biāo)準(zhǔn)品