以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Pumosetrag Hydrochloride(MKC-733;DDP-733)是一種可用的5-HT3部分激動(dòng)劑,開發(fā)用來(lái)治療腸易激綜合征和胃食管反流病。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):194093-42-0 別名:MKC-733;DDP-733 純度:99.27% 分子式:C??H??ClN?O?S 分子量:339.84 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
食品檢測(cè)用鼠傷寒沙門氏菌熱休克蛋白受體家族蛋白7B2抗體Human CFP(Properdin) ELISA Kit驢卵泡激(FSH)免疫試劑盒
解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種Heme結(jié)合蛋白2抗體Human SECISBP2 ELISA Kit驢黃體生成(LH)免疫試劑盒
大麗輪枝孢肝粘附分子2抗體Human SEC63 ELISA Kit驢雌二(E2)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌基己糖苷D抗體Human RRBP1(Ribosome-binding protein 1) ELISA Kit鹿ELISA Kit
雞白痢沙門氏菌HHLA2蛋白抗體Human Secretin receptor ELISA Kit鹿胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)免疫試劑盒
放射桿狀根瘤菌羥脯抗體Human SECTM1(Secreted and transmembrane protein 1) ELISA Kit鹿胰島樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)免疫試劑盒
壺黑蛋巢布諾德變型熱休克蛋白10抗體Human PGS1(CDP-diacylglycerol–glycerol-3-phosphate 3-phosphatidyltransferase, mitochondrial) ELISA Kit鹿血清淀粉樣蛋白A(SAA)免疫試劑盒
香菇同源盒蛋白PRH抗體Human Securin/PTTG1 ELISA Kit鹿尿氧化免疫試劑盒
谷棒桿菌羥類固脫氫17β抗體Human SELK ELISA Kit鹿內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫試劑盒
釀酒酵母皰疹病相關(guān)泛特異性蛋白7抗體Human SEMA3C ELISA Kit鹿免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒
黃曲霉同源異型盒基因HOXA5蛋白抗體Human SDHC ELISA Kit鹿氧化(XOD)免疫試劑盒
棲土曲霉異染色質(zhì)蛋白1-α(HP1α)抗體Human SDHB ELISA Kit鹿環(huán)磷腺苷(cAMP)免疫試劑盒
Lactococcus組蛋白H4抗體Human AKAP17A(A-kinase anchor protein 17A) ELISA Kit鹿環(huán)磷鳥苷(cGMP)免疫試劑盒
棒曲霉乙?;M蛋白H4抗體Human SDR39U1 ELISA Kit鹿紅膜蛋白(EMP)免疫試劑盒
香茅假單胞菌基化組蛋白H3抗體Human SDPR ELISA Kit鹿次氧化免疫試劑盒
放射形根瘤菌二甲基化組蛋白H3抗體Human SDR42E1 ELISA Kit鹿γ干擾(IFNG)免疫試劑盒
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,96%佛手柑內(nèi)酯
曲霉Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品白花前胡
皺紋假單胞菌Pseudomonas│corrugata 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品花椒
5-HT3激動(dòng)劑(Pumosetrag Hydrochloride)BAFFR/CD268 B活化因子受體抗體異丁香酚(正+反) 用于環(huán)境分析
bFGF/FGF-2 性成纖維生長(zhǎng)因子抗體異戊 99%
BGP 骨保護(hù)蛋白/骨鈣抗體無(wú)水三化鐵 ≥99.99% metals basis
Bid BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體三氟磺銦 98%
BIN1 橋連整合因子蛋白抗體2-亞氨生物 98%
Bim 死亡調(diào)解子抗體肌苷-5′-二鈉鹽 99%
phospho-Bim(Ser87) 化死亡調(diào)解子抗體5--2- 98%
phospho-Bim(Ser55) 化死亡調(diào)解子抗體胰島 ≥27 USP units/mg (HPLC)