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詳細(xì)介紹
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
20T | 1～3天 |
商品介紹：
保存條件：-20℃冰凍保存。 保存期：一年 工作原理： 在機體內(nèi)部隨時都在發(fā)生著細(xì)胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來觀察細(xì)胞的死亡，其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚，時間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活，細(xì)胞自身的染色質(zhì)或DNA 被切割，出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口，并產(chǎn)生與DNA斷點數(shù)目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將標(biāo)記的dUTP(DIG-dUTP)標(biāo)記至3’-OH 末端，DIG-dUTP 結(jié)合在DNA斷點部位，可以通過生物素化抗抗體(Anti-DIG-Biotin)和 SABC-AP反應(yīng)后，加入顯色底物 BCIP/NBT予以顯示。凋亡的細(xì)胞核呈紫藍(lán)色，從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細(xì)胞。 試劑盒內(nèi)容： 1.標(biāo)記緩沖液(Labeling Buffer)1ml 2.末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)20μl 3.DIG-dUTP(×20)20μl 4.封閉液(Blocking Reagent)4ml 5.生物素化抗抗體(×100)20μl 6..SABC-AP(×100)20μl 7.Proteinase K(×200)50μl 8.BCIP/NBT 顯色劑(×20)0.2ml 9.抗體稀釋液4ml |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時內(nèi)檢測）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時，活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
白細(xì)胞介24(IL24)英文名稱：IL24 ELISA Kit12號染色體開放閱讀框42抗體包裝100g
白細(xì)胞激活黏附因子(ALCAM)英文名稱：ALCAM ELISA Kit11號染色體開放閱讀框46抗體包裝25g
白細(xì)胞彈性蛋白抑制因子(LEI)英文名稱：LEI ELISA Kit11號染色體開放閱讀框67抗體包裝500g
白三烯A4解(LTA4H)英文名稱：LTA4H ELISA Kit11號染色體開放閱讀框77抗體包裝5g
白介9(IL9)英文名稱：IL9 ELISA Kit11號染色體開放閱讀框16抗體包裝25g
白介8受體β(IL8Rβ)英文名稱：IL8Rβ ELISA Kit11號染色體開放閱讀框21抗體包裝5g
白介8受體α(IL8Rα)英文名稱：IL8Rα ELISA Kit11號染色體開放閱讀框24抗體包裝1g
白介7(IL7)英文名稱：IL7 ELISA Kit11號染色體開放閱讀框53抗體包裝500mg
白介6受體(IL6R)英文名稱：IL6R ELISA Kit11號染色體開放閱讀框57抗體包裝1g
白介6(IL6)英文名稱：IL6 ELISA Kit11號染色體開放閱讀框65抗體包裝25g
白介5受體α(IL5Rα)英文名稱：IL5Rα ELISA Kit11號染色體開放閱讀框71抗體包裝5g
白介5(IL5)英文名稱：IL5 ELISA Kit11號染色體開放閱讀框74抗體包裝100g
白介4(IL4)英文名稱：IL4 ELISA Kit12號染色體開放閱讀框4抗體包裝25g
白介35(IL35)英文名稱：IL35 ELISA Kit12號染色體開放閱讀框24抗體包裝1g
白介34(IL34)英文名稱：IL34 ELISA Kit環(huán)核苷門控陽離子通道蛋白CNG-1β抗體包裝5g
白葉枯病菌Xanthomonas│oryzae pv. oryzae 質(zhì)量規(guī)格：>99%試劑盒鹽去氫駱駝蓬堿;Harmine Hyd
藤黃微球菌Micrococcus│luteus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR音猬因子N端試劑盒異佛手柑內(nèi)酯 ;Isobergapten
: 1197資源名稱: 福氏志賀氏菌 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品音猬因子試劑盒右旋四氫巴馬汀 ; D-Tetrahyd
細(xì)胞凋亡檢測試劑盒Ⅱ(AP)枯草芽孢桿 N-BOC-環(huán)谷氨酰Elisa
微小桿 超氧化物歧化1Elisa
釀酒酵母 4-溴-1-甲基-1H-1,2,3-噻唑鈣離子Elisa
蟻巢傘屬 5-溴-2-氯-6-甲基吡啶巨泌乳Elisa
金灰青霉 4-N-CBZ-氨甲基AFB1-DNA加合物Elisa
露濕漆斑 雙硬脂酸甘油酯甲胎蛋白1Elisa
根瘤 單硬脂酸酯血脂Elisa
淺綠氣球 5-氯吡啶-2-羧酸甲酯恢復(fù)蛋白Elisa
小青霉 (2R,3S)-3-苯基異絲氨酸鹽酸鹽鈣Elisa
枯草芽孢桿 1(或2)-甲基萘磷Elisa
松杉靈芝 3-氯-4-(吡啶-3-基)-1,2,5-噻二唑白介33受體Elisa
尖孢鐮刀棉花?；?/span> 2--5-NSMCE2Elisa
梨頭霉(+) 2-溴-5-溴甲基噻唑谷氨酸鹽Elisa
凸臍儒孢 2-三氟甲基-4-氯吡啶磷脂酸Elisa
古布爾班克氏屬 6-(三氟甲基)吡啶-2-甲酸軟脂酸Elisa
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