詳細介紹
使用方法:
測定法的靈敏度來自作為報告的酶。,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,產(chǎn)生可供觀察的顯色反應現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 24μg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12μg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6μg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3μg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5μg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
ELISA Kit檢測試劑盒優(yōu)點多,更加方便我們的科研學者進行科學實驗,是科研實驗的好伙伴。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
TNF-β ELISA Kit | GOY-E100130 |
實驗流程:
1. 實驗前標準品、試劑及樣本的準備;
2. 加樣(標準品及樣本)100µL,37°C孵育1小時;
3. 吸棄,加檢測溶液A100µL,37°C孵育1小時;
4. 洗板3次;
5. 加檢測溶液B100µL,37°C孵育30分鐘;
6. 洗板5次;
7. 加TMB底物90µL,37°C孵育10-20分鐘;
8. 加終止液50µL,立即450nm讀數(shù)。
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1.加樣:
①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;
②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;
③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經(jīng)常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。
2.溫育:
①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;
②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;
③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應”,因此盡量采用水?。?/span>
3.洗板:
①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;
②洗板機洗板時應經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;
③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數(shù);
4.顯色:
ELISA試劑盒中,如以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。
5.判定:
讀取結果要在15-30 min內完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。
槐果堿 英文名稱:Sophocarpine 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 酪氨激酶C抗體
烏藥內酯 訂購|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 腺苷受體A3抗體 MUC2 ELISA Kit 粘蛋白2(MUC2)ELISA試劑盒
多西他賽 英文名稱:Docetaxel 保存:-20℃ 規(guī)格:50mg 視黃受體應答蛋白2抗體
刺芒柄花素 、芒柄花素 英文名稱:Formononetin, formononetin 保存:-20℃ 規(guī)格:HPLC≥98% 20mg/支 味覺感受器蛋白T2R38抗體
糠莫米松 英文名稱:Mometasone furoate 保存:-20℃ 規(guī)格:100mg/支 化視網(wǎng)膜母細胞瘤樣蛋白p107抗體
雷公藤內酯(標準品) 質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 Triptonide 泡盛曲霉 Aspergillus awamori釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
基正壬 英文名稱:Methyl nonyl ketone 保存:-20℃ 規(guī)格:0.1ml 原鈣粘附蛋白1抗體
澳茄新堿 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人絲裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶(MAPK)ELISA試劑盒人96T0.156-10 ng/mL大鼠色氨羥化酶(TPH)ELISA試劑盒,英文名:TPH ELISA Kit
*泊甙(進分) 質量規(guī)格:>98%,進分,sigma E1383 Etoposide 疊氮鈉葡萄糖肉湯/Azide Dextrose Broth鏈球菌、腸球菌、糞鏈球菌的增菌培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口
千金子甾 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人吲哚胺2,3-雙加氧酶1(IDO-1)ELISA試劑盒人96T1.56-100 ng/mL小鼠β-內啡肽(βEP)ELISA試劑盒,英文名:βEP ELISA Kit
仙鶴草酚D 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒人96T31.2-2000 pg/mL小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒,英文名:Gzms-A ELISA Kit
5,6-二基呫噸-4- 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 人纖維膠凝蛋白2(FCN2)ELISA試劑盒人96T78-5000 pg/mL小鼠神經(jīng)型一氧化氮合酶(*)ELISA試劑盒,英文名:* ELISA Kit
四環(huán)素 英文名稱:Tetracycline 保存:-20℃ 規(guī)格:200mg N-酰轉移酶8B抗體
TNF-β腫瘤壞死因子βELISA Kit液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FTM) 無菌實驗的厭氧菌和需氧菌培養(yǎng)100mL*25
Demi-Fraser肉湯基礎 與Fraser肉湯添加劑合用,選擇性增強食品樣本中李斯特菌500g
Thioglycolate medium G 疏基乙酸鹽培養(yǎng)基G 1.16761.0500MERCK默克
溴百里酚藍乳糖胱氨酸瓊脂
Fraser肉湯基礎 250(g)
MLCB瓊脂 250(g)
煙酸測定用培養(yǎng)基 100(g)
煌綠乳糖膽鹽肉湯(BGLB) 1000(g)
Iso-Sensitest 瓊脂 (CM0471) Oxoid
DMEM(高糖),液體 含4500mg/l葡萄糖,L-谷氨酰胺
25mM HEPES,不含酸鈉12430-054
Cetrimide Agar Base