以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
商品介紹:
CCCP是一種質(zhì)子載體(H+ ionophore),強效的線粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑,促使線粒體內(nèi)膜對H+產(chǎn)生通透性,導(dǎo)致線粒體內(nèi)膜兩側(cè)的膜電位喪失,誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。也可作用于葉綠體膜,抑制光合作用;CCCP還可抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體(ER-Golgi)之間的蛋白轉(zhuǎn)運,高親和力結(jié)合細胞色素氧化酶。 CAS號:555-60-2 分子式:C9H5ClN4 分子量:204.62 儲存條件:-20℃保存 純度:≥97% (TLC) CCCP還具有其他功能: 1)在牛蛙交感神經(jīng)方面的實驗表明,CCCP 可增強促黃體生成素釋放激素的釋放; 2)作為一種質(zhì)子導(dǎo)體在葡萄糖存在的情況下影響E.coli 細胞活性; 3)對細胞內(nèi)鈣水平的各種調(diào)節(jié)效應(yīng); 4)抑制脂肝酶的分泌; 5)部分抑制pH梯度活化的Cl-攝取以及刷狀緣膜的Cl-/Cl-交換等。 本品是溶于DMSO的CCCP溶液,濃度為50mM,體積為100μl(相當于1mg的總量),常用作一種陽性對照來誘導(dǎo)細胞凋亡,并配合線粒體膜電位檢測探針JC-10(貨號:J8050)來進行相關(guān)研究。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
白介15(IL15)英文名稱:IL15 ELISA Kit1號染色體開放閱讀框103抗體包裝100g
白介13受體α2(IL13Rα2)英文名稱:IL13Rα2 ELISA Kit兒茶酚O基移位抗體包裝25g
白介13(IL13)英文名稱:IL13 ELISA Kit補體C1qTNF9鏈多肽抗體包裝5g
白介12B(IL12B)英文名稱:IL12B ELISA Kit平滑肌鈣調(diào)蛋白CNN2抗體包裝1g
白介12A(IL12A)英文名稱:IL12A ELISA Kit心肌病相關(guān)蛋白2包裝5g
白介11受體α(IL11Rα)英文名稱:IL11Rα ELISA Kit5號染色體開放閱讀框34抗體包裝100g
白介11(IL11)英文名稱:IL11 ELISA KitE1A激活基因激蛋白1抗體包裝25g
白介10(IL10)英文名稱:IL10 ELISA Kit2號染色體開放閱讀框42抗體包裝5g
八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(OCT4)英文名稱:OCT4 ELISA Kit豬瘟病抗體包裝1g
酰tRNA合成復(fù)合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)英文名稱:AIMP1 ELISA Kit3號染色體開放閱讀框54抗體包裝5g
基己糖苷Bβ(HEXβ)英文名稱:HEXβ ELISA Kit2號染色體開放閱讀框43抗體包裝5g
基己糖苷Aα(HEXα)英文名稱:HEXα ELISA Kit豬瘟病抗體包裝5g
基端前心鈉肽(NT-ProANP)英文名稱:NT-ProANP ELISA Kit中心體蛋白110抗體包裝1g
基端前腦鈉(NT-ProBNP)英文名稱:NT-ProBNP ELISA Kit纖維包裝5g
阿黑皮原(POMC)英文名稱:POMC ELISA Kit分裂周期蛋白14B抗體包裝10ml
假單胞菌Pseudomonas│testosteroni 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)異質(zhì)性胞核核糖核蛋白M試劑盒鹽葫蘆巴堿;Trigonelline
金黃色葡萄球菌Staphylococcus│aureus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,標準品異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L試劑盒鹽石蒜堿;Lycorine hydro
疣孢青霉Penicillium│verruculosum 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進分,sigma E1383 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L試劑盒雅姆皂苷元 ;yamogenin
CCCP細胞凋亡誘導(dǎo)劑(50mM)銹赤蠟黃鏈霉 1-芐氧羰基-3-羥基氮雜環(huán)丁烷喋呤抗體Elisa
慢生根瘤 2,4-二溴吡啶-3-甲胃動蛋白2抗體Elisa
釀酒酵母 3,4-雙(二氟甲氧基)苯甲Ⅱ型膠原α1Elisa
泡盛曲霉 6-溴-7-氟喹啉無翅型MMTV整合位點家族成員1Elisa
馬沙門氏 1-Boc-2-T因子Elisa
白黃馬賽 1-二茂鐵基乙尿肌酐Elisa
黃曲霉 2-氯-4-甲氧基苯青霉Elisa
芽孢桿 N,N-雙(4-磺丁基)-3-鏈霉Elisa
布魯塞爾德克酵母 2-基-4-氟甲酯慶大霉Elisa
食有機物深海芽孢桿 6-氯-1,8-二氮雜萘-2(1H)-酮相關(guān)抗原11AElisa
卡門柏青霉 3-氟-4-溴溴芐肝吸蟲Elisa
Methylibium 基二茂鐵全反鈷II型Elisa
釀酒酵母 H-89 肝吸蟲IgM抗體Elisa
毛栓孔 1-甲基-1H-吡唑-4-肝吸蟲IgG抗體Elisa
類芽孢桿屬 1-N-芐氧羰基哌-2-甲酸甲酯抗磷脂A2受體IgG抗體Elisa