以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Valdecoxib(SC65872)是高效COX-2抑制劑,IC50為5nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:181695-72-7 別名:SC 65872 純度:99.91% 分子量:314.36 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
污黑腐皮殼螺旋一環(huán)一螺旋蛋白5抗體Human GPR107 ELISA Kit小鼠白活化黏附因子(ALCAM)免疫試劑盒
綠色鏈霉菌二磷3核苷抗體Human GPR108 ELISA Kit小鼠白三烯E4(LTE4)免疫試劑盒
微小桿菌腦蛋白絲/蘇激29抗體Human GPR116(G-protein coupled receptor 116) ELISA Kit小鼠白三烯D4(LTD4)免疫試劑盒
靈芝智力發(fā)育調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白BRWD3抗體Human GPR123 ELISA Kit小鼠白三烯C4(LTC4)免疫試劑盒
水溶性非食用色快速篩查盒生物抗體Human GP repeat ELISA Kit小鼠白三烯B4(LTB4)免疫試劑盒
蟬擬青霉Bax相互作用因子1抗體Human GPAA1 ELISA Kit小鼠白介9(IL-9)免疫試劑盒
高地芽孢桿菌表皮生長因子反應(yīng)蛋白2抗體Human GPATCH2 ELISA Kit小鼠白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒
平菇BCL2相關(guān)X蛋白抗體Human GPBP1 ELISA Kit小鼠白介7(IL-7)免疫試劑盒
蠟樣芽孢桿菌Bcl2樣凋亡蛋白13抗體Human GPATCH4(G patch domain-containing protein 4) ELISA Kit小鼠白介6(IL-6)免疫試劑盒
金黃殼囊孢菌Bcl2樣凋亡蛋白14抗體Human GTF2A2 ELISA Kit小鼠白介-5(IL-5)免疫試劑盒
斑玉蕈Bcl2蛋白修飾因子抗體Human GTF2E1 ELISA Kit小鼠白介4(IL-4)免疫試劑盒
金針菇(毛柄金錢菌、冬菇)骨形態(tài)發(fā)生蛋白11抗體Human GTF2F1 ELISA Kit小鼠白介35(IL-35)免疫試劑盒
大腸埃希菌BCL2樣15促凋亡蛋白抗體Human GSG1L ELISA Kit小鼠白介33(IL-33)免疫試劑盒
藍(lán)色犁頭霉骨堿性磷抗體Human GSDMD ELISA Kit小鼠白介31(IL-31)免疫試劑盒
葡萄座腔菌磷化T淋巴連接蛋白抗體Human GSPT1 ELISA Kit小鼠白介3(IL-3)免疫試劑盒
金耳、 黃木耳磷化T淋巴連接蛋白抗體Human GSPT2 ELISA Kit小鼠白介2受體β(IL2rb/CD122)免疫試劑盒
固氮菌Azotobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:BRβ膠原交聯(lián)試劑盒人參皂苷Rk3
輪枝孢Verticillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRβ-肌動蛋白試劑盒人參炔
詹氏桿菌Propionibacterium│jensenii 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRβ-黑色激試劑盒肉豆寇單甘油酯
COX-2抑制劑(Valdecoxib)西青果(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Timosaponin BIIT激活核轉(zhuǎn)錄因子4抗體包裝5g
西瑞香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2',3'-Dideoxyguanosine腦低密度脂蛋白受體蛋白1抗體包裝25g
西洋參(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Anemarsaponin E軸突蛋白2抗體包裝5g
菥蓂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Phytic acid腎小球粘附分子受體抗體包裝100g
溪黃草(線紋香茶菜)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Polyphyllin I神經(jīng)生長調(diào)節(jié)蛋白1抗體包裝25g
豨薟草(豨薟)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Polyphyllin II軸突生長誘向因子G2抗體包裝1g
洗碗葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Polyphyllin VI黑色瘤硫軟骨蛋白多糖4抗體包裝25g
喜馬拉雅紫茉莉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Polyphyllin VIINDST1蛋白抗體包裝5g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Hyodeoxycholic acidEGR1結(jié)合蛋白2抗體包裝1g
細(xì)辛(北細(xì)辛)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Hyodeoxycholic acid硝基化α-突觸核蛋白包裝250g
細(xì)辛脂(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Raddeanin ANK2轉(zhuǎn)錄樣蛋白B抗體包裝100g
細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Catalpol神經(jīng)正五聚體1抗體包裝25g
夏佛塔苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Shikonin核孔蛋白NUP160抗體包裝5g
夏枯草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lithospermic acid核分離基因C蛋白抗體包裝1g
夏天無(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Syringin磷化核分離基因C蛋白抗體包裝25g