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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-21 13:25:44瀏覽次數(shù)：230
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T|100T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X9698 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 |
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：Annexin V-PE/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T
發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹：
產(chǎn)品背景： 細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過(guò)程等方面起著十分重要的作用。 在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識(shí)別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過(guò)程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過(guò)程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過(guò)程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS 高親和力特異性結(jié)合。PS 外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測(cè)標(biāo)志事件。 檢測(cè)原理： 在正常的活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine，PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細(xì)胞中，PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。 Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結(jié)合?？赏ㄟ^(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。用標(biāo)記了PE的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。細(xì)胞壞死的過(guò)程中也會(huì)發(fā)生細(xì)胞膜損傷，壞死的細(xì)胞會(huì)結(jié)合Annexin V-PE。 Annexin V-PE 通常與細(xì)胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測(cè)凋亡細(xì)胞。常用的染料是7-AAD。正常細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和壞死細(xì)胞，7-AAD 能夠透過(guò)細(xì)胞膜與細(xì)胞核結(jié)合呈現(xiàn)紅色。 7-AAD/Annexin V-PE試劑盒將AnnexinⅤ與7-AAD匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來(lái)。壞死細(xì)胞可以同時(shí)與Annexin V-PE和7-AAD 結(jié)合顯色，而7-AAD 則被排除在活細(xì)胞(PE陰性)和早期凋亡細(xì)胞(PE陽(yáng)性)之外。在沒有巨噬細(xì)胞的情況下，凋亡的后階段會(huì)像細(xì)胞壞死一樣發(fā)生整個(gè)細(xì)胞的解體，從而使凋亡晚期的細(xì)胞也同時(shí)被PE和7-AAD 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽(yáng)性。 儲(chǔ)存條件：染色液2-8℃避光保存；結(jié)合液2-8℃保存；長(zhǎng)期不用-20℃保存。 Annexin V-PE染色液避免反復(fù)凍融，凍融2次以上可能會(huì)失效。長(zhǎng)期保存分裝后-20℃保存。 有效期：一年。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；
②生物膜與細(xì)胞器的研究；
③細(xì)胞骨架體系的研究；
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
鹽洛美利英文名稱： Lomefloxacin HCl結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CITED1抗體包裝10MG
鹽馬尼地平英文名稱： Lomefloxacin HClⅡ型膠原α1蛋白/軟骨鈣抗體包裝100mg
鹽美西律（慢心率）英文名稱： Loteprednol EtabonateCSMD2蛋白抗體包裝500mg
鹽尼非卡蘭英文名稱： Loteprednol EtabonateCSMD3蛋白抗體包裝1g
鹽尼卡地平英文名稱： Lovastatin,Monacolin K鈣調(diào)神經(jīng)磷CSTP1抗體包裝250mg
鹽普拉格雷英文名稱： Lovastatin,Monacolin KCTAGE6蛋白抗體包裝1g
鹽普魯英文名稱： Lubiprostone皮膚T淋巴瘤相關(guān)抗原4抗體包裝1g
鹽曲美他英文名稱： Lypressin Acetate膜蛋白CLDND2抗體包裝25g
鹽索他洛爾英文名稱： Matrixyl Acetate含半胱和組豐富域蛋白1抗體包裝5g
鹽特拉唑英文名稱： Meclofenoxate HCl豬圓環(huán)?、蛐鸵職さ鞍装b5g
鹽替羅非班英文名稱： Meclofenoxate HCl抗菌肽CAMP抗體包裝1g
鹽維拉帕米英文名稱： Megestrol Acetate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白134抗體包裝5g
依那普利拉英文名稱： Megestrol Acetate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白69抗體包裝1g
依普利英文名稱： Melanotan ⅡAcetate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白98抗體包裝5g
*貝特英文名稱： Meloxicam卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白70抗體包裝1g
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR循環(huán)免疫復(fù)合物試劑盒鹽藥根堿;Jatrorrhizine
黃曲霉Aspergillus│flavus 質(zhì)量規(guī)格：>98%血影蛋白試劑盒銀杏內(nèi)酯C;Ginkgolide C
細(xì)腳擬青霉Paecilomyces tenuipes 質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α試劑盒葉;Folic acid
Annexin V-PE/7-AAD細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒Sphingobium amiense 2-氨基-4,5-雙(2-甲氧基乙氧基)苯活化凝血因子VIIaElisa
大豆慢生根瘤 2,4-二氯苯蛋白質(zhì)羰基化合物Elisa
粘質(zhì)沙雷氏 2,4-二氯芐氯蛋白質(zhì)亞硝基化Elisa
藤黃微球 2-溴-9-苯基-9H-咔唑一氧化氮代謝產(chǎn)物Elisa
毛栓孔 1-(5-氯吡啶-2-基)乙酮C型膠原蛋白Elisa
糙孢籃狀 5-(3-氯-2-氟苯甲基)-2,4-二甲氧20-羥基蛻皮Elisa
大球蓋菇 二氫-2,4,6-基-1,3,5-(4H)二噻I型膠原交聯(lián)羧基端肽Elisa
韓國(guó)鞘氨單胞 3-[(2-)氨基]促胰島生長(zhǎng)Elisa
*正紅菇 3-[(2-)氨基]晚期糖基化終產(chǎn)物特異性受體Elisa
釀酒酵母 4-[(N-叔丁氧羰基)氨甲基]苯骨成型蛋白3Elisa
多汁乳菇 2-苯基肺炎支原體IgG抗體Elisa
淺黃微桿 2-羥基萘-1-羧酸甲酯涎液化糖鏈抗原6Elisa
榛針孢酵母 2-氟-6-(二氟甲氧基)吡氨基肽AElisa
腸膜明串珠腸膜亞種 4-溴吡啶-2(1H)-酮AMPA離子能谷氨酸受體1Elisa
乳桿屬 鄰乙氧基星形膠質(zhì)源性蛋白Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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